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本文通过葡萄无核品种×无核品种(种内杂交),葡萄无核品种×葡萄有核品种(种间杂交),共13个组合,一个自然授粉、一个自交。种间杂交的组合是红光无核×黑龙江实生。受莫无核×左山1号,长穗无核白×北醇,无核白×蘡奠,红宝石×红地球,无核白×左山1#,红宝石×北醇,大粒红×河岸,郑州无核×山葡萄,京早晶×黑龙江实生,京早晶×蘡奠;种内杂交的是大粒红×无核白,红宝石×爱莫;自然授粉组合的为黎明无核;自交组合的为无核白。对影响无核葡萄品种胚珠培养的时间,基本培养基,胚发育培养基,萌发培养基,成苗培养基,胚挽救试管曲的茎段培养,移栽炼苗等进行了研究;并对黎明无核、北醇,杂交种葡萄无核品种×葡萄有核品种,红光无核×黑龙江实生的胚发育进行连续解剖学和形态学观察;测定了葡萄无核品种,葡萄有核品种、葡萄无核品种×有核品种以及杂交种胚发育过程中POD、CAT、SOD酶活性,可溶性淀粉、可溶性糖、可溶性蛋白质在胚发育和败育过程的变化。 一、主要取得以下研究结果 1.通过胚挽救技术,以葡萄无核品种为母本的13个组合,共获得苗子87株,其中种内杂交的大粒红无核×无核白17棵。种间杂交的无核白×蘡奠6棵,红光无核×黑龙江实生12棵,长穗无核白×北醇12棵,爱莫无核×左山1号10棵,另外还有18棵黎明自然授粉,13棵自交的无核白。 2.筛选出最适宜胚挽救的基本培养基和各杂交组合最适宜胚发育、萌发,成苗培养基。 以自然授粉40d的黎明无核,SP137无核,离体胚珠分别接种在B5、MS,Nitsch三种基本培养基中培养,结果表明,以Nitsch为基本培养基效果最好,进行胚珠培养时,在Nistch发育培养基中添加6%的蔗糖、1%的PVP和500mg·L-1的酪蛋白,待胚发育后接到3%的蔗糖,300mg·L,0.1%PVP的胚萌发培养基上培养,幼胚萌发10—20天后转接到2%蔗糖的1/2MS成苗培养基中,使肝发育、萌发、成苗效果较佳。 以Nistch培养基为基础添加(IBA 2.5mg·L-1+GA3 0.5mg·L-1+6-BA 0.5mg·L-1+2T0.1mg·L-1)构成胚发育培养基(A3培养基),在此培养基上表现较好的组合为:红光无核×黑龙江实生,无核白×左山1号,红宝石×北醇,大粒红无核×河岸葡萄,京早晶×黑龙江实生,京早晶×蘡奠(安林2号)。在发育培养基(A2培养基)(IBA 2.Omg·L-1+GA3 0.5mg·L-1+6-BA 0.5mg·L-1+2T0.1mg·L-1)表现较好的为红宝石×红地球,长穗无核白×北醇,大粒红无核×无核白、红宝石×爱莫无核、无核白自交、黎明自然授粉、爱莫无核×山葡萄、郑州无核×黑龙江实生。 以Nistch基本培养基为基础添加(IBA 1.5mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1+GA3 0.2mg·L1)构成胚萌发培养基,在此培养基(B2)表现较好的组合为长穗无核白×北醇,无核白×蘡奠(泰山1号)、大粒红×无核白,黎明自然授粉、受莫×左山1号,在萌发培养基(B3)(IBA 2.0mg·L1+6-BA1.0mg·L1+GA3 0.2mg·L1)表现较好的为红光无核×黑龙江实生,无核白×无核白。但红宝石×北醇,红宝石×爱莫无核,郑州无核×黑龙江实生,京甲晶×黑龙江实生,京早晶×蘡奠的胚萌发培养基需探讨。 以1/2MS基本培养基添加(IBA0.15rmg·L1+6-BA 0.02mg·L1)构成苗培养基(C2),在此培养基上表现较好的有红光无核×黑龙江实生,长穗无核白×北醇,大粒红无核×无核白,无核白X无核白,黎明自然授粉、无核白X(塑奠),爱莫无核X左山1号。 以1/ZMS为基础培养基添加(0.08mg·L IBA)构成的试管苗茎段培养基(D),在D;培养基上表现较优的为无核白X泰山 1号,医穗无核白XJL醇,爱莫X左LIJI号。在(l/ZMS+0.cling1IBA)的 D。培养基上表现较优的为红光无核 X黑龙江实生,黎明囱然授粉、无核白 X无核白。在(l/ZMS+0.二Zing·L)的 D;;培养基上表现秋灯的为人粒红无核x无核白。 3.确定了各杂交组合的最佳取材培养时间 无核葡萄不同品种及其杂交组合胚挽救的最佳取材时期不同,大致介于授粉后30—45d之间,具体组合为,红光无核X黑龙江实生、黎明自然授粉、爱莫无核X左山1号,红宝石X北醇均是授粉后的大取胚珠培养效果好丁叨d:长穗无核白x北醇为授粉后30d,无核白X勇奠,人粒红无核X无核白,无核白X无核白,为授粉后35d。其余组合为郑州无核丫黑龙江实生,京早晶X黑龙江实生,京早晶X@奠,人粒红X河岸,红宝石X红地球,无核白X左山二号,红宝石X受臭的取样时间有待进一步6)f究。 4.探索无核葡萄胚发育和胚败育的细胞学机理 以有核品种北醇,自然授粉黎明无核,杂种红光无核X黑龙江实生为材料,通过人蜡切片观察了授粉后0——55大胚珠的发育,发现葡萄无核品种、有核品种、杂种胚的发育都经历合于胚~二分体一多细胞时期一球形胚一心形胚一成熟胚。黎明无核自然授粉以及红光无核X黑龙江实生的杂种胚发育到心形胚后期的少。通过细胞学的观察,发现葡萄无核品种及其杂种胚败育的机理为①合子胚发育不良,引起胚退化。②珠心珠被发育异常,引起胚发育缓慢、异常,导致胚退化。③胚乳提前解体?