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目的:采用链脲佐菌素一次性注射法诱导糖尿病周围神经病变大鼠模型,通过观察“调脏通络”电针对模型大鼠的热敏感度、神经传导速度、坐骨神经病理形态学超微结构和细胞凋亡比例及内质网应激标志性蛋白GRP78和关键分子Caspase-12的影响,探讨上述变化与内质网应激水平的关系,从而揭示“调脏通络”电针保护糖尿病周围神经病变大鼠周围神经细胞凋亡的效应机制。方法:实验共用大鼠86只,其中5只正常健康大鼠作为正常对照组,其余81只采用链脲佐菌素一次注射法诱导建立糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠造模成功后,将模型大鼠随机分为3组,分别为模型对照组、电针干预组和药物干预组。正常对照组和模型对照组大鼠在同等条件下,予以大鼠维持饲料喂养,实验过程中,同等条件下抓取一次,不予任何特殊处置,仅作正常对照观察;电针干预组给予“调脏通络”电针进行干预;药物干预组给予甲钴胺灌胃。成模后即进行电针和药物干预,并监测大鼠一般状况、体重和血糖的变化。分别于糖尿病造模前、成模时及干预4W、12W后检测各组实验大鼠热敏感度值,分别于干预前及干预12W后测定大鼠胫神经传导速度,并于干预12W后取大鼠坐骨神经,应用透射电镜观察大鼠坐骨神经病理形态学超微结构的变化、应用TUNEL染色技术检测实验大鼠坐骨神经细胞凋亡比例、应用免疫荧光技术及Western Blot技术检测实验大鼠坐骨神经GRP78和Caspase-12的表达水平。结果:1糖尿病动物模型的建立及相关指标改变1.1实验动物一般状况:本实验糖尿病成模率为97.5%。正常对照组大鼠一般情况良好,毛色光泽度较好,反应灵敏,摄食、饮水正常。模型对照组大鼠在注射了链脲佐菌素,制作成糖尿病模型后,毛色光泽度逐渐变差,反应迟钝,明显呈现多饮、多食、多尿症状。电针干预组和药物干预组大鼠毛色光泽度欠佳,反应较迟钝,摄食、饮水量及尿量均明显增多。1.2各组大鼠体重变化结果:正常对照组大鼠体重增长稳定,三组模型组大鼠糖尿病成模时体重即有显著下降;至干预12W后,体重较成模时显著降低(P<0.01),与干预组相比,模型对照组大鼠体重显著下降(P<0.01)。电针干预组和药物干预组大鼠造模成功后较造模前体重显著下降;造模后,随着病程时间延长,体重又呈逐渐上升趋势;电针干预组在干预4W后,与造模成功时相比,体重有显著增长(P<0.05);药物干预组在干预8W后,与造模成功时相比,体重有显著增长(P<0.05);干预4W后,电针干预组体重显著高于药物干预组(P<0.05),但在干预8W、12W后两组间比较,无显著差异(P>0.05)。1.3各组大鼠血糖测定结果:成模时对照组、电针干预组和药物干预组大鼠的随机血糖值均明显高于正常对照组大鼠及各组造模前大鼠随机血糖值(P<0.01),且随着病程时间延长,血糖水平逐渐升高;在干预12W后,模型对照组、电针干预组、药物干预组大鼠血糖均无显著性差异(P>0.05)。1.4热敏感度测定结果:糖尿病模型制作成功后,随着病程时间延长,大鼠热敏感度值逐渐降低。组间比较:造模前及成模时,各组大鼠热敏感度值比较均无显著差异;干预4W、12W后,与模型对照组相比,干预组热敏感度值均显著高于模型对照组(P<0.01);干预4W后,电针干预组和药物干预组热敏感度值无显著差异;干预12W后,与电针干预组相比,药物干预组热敏感度值显著降低(P<0.01)。组内比较:糖尿病造模前与成模时,各组热敏感度值比较无显著差异;干预4W、12W后,模型组及干预组大鼠热敏感度值较造模前及成模时,均显著降低(P<0.05)。2胫神经传导速度实验结果:糖尿病造模成功后,各组大鼠感觉神经传导速度、运动神经传导速度比较,均无显著差异。干预12W后,组间比较:与模型对照组相比,电针干预组和药物干预组均能明显改善大鼠感觉神经传导速度、运动神经传导速度,差异具有显著性意义(P<0.01);与药物干预组相比较,电针干预组对大鼠感觉神经传导速度、运动神经传导速度改善优于药物干预组,但差异无显著性意义(P>0.05)。组内比较:与干预前相比较,各组大鼠感觉神经传导速度、运动神经传导速度均显著减慢(P<0.01)。3干预12W后坐骨神经超微结构变化:于1500倍透射电子显微镜下观察结果:正常对照组大鼠坐骨神经可见有髓神经纤维轴膜清晰,轴索较粗,神经轴索内电子密度均匀,髓鞘结构完整包绕在轴突外,髓鞘板层规则排列,髓鞘结构完整致密、均匀规则;模型对照组可见部分髓鞘板层疏松呈不规则的膜样团块,多见较粗的有髓神经纤维受累严重;电针干预组和药物干预组上述改变均减轻,有些神经纤维仍可见局部的板层分离现象。4干预12W后坐骨神经TUNEL阳性细胞分布情况:模型对照组大鼠坐骨神经有大量TUNEL阳性细胞分布,电针及药物干预组TUNEL阳性细胞分布介于正常对照组及模型对照组之间;与正常对照组相比,模型对照组、电针干预组及药物干预组大鼠凋亡细胞比例均显著升高(P<0.01),与模型对照组相比,电针干预组及药物干预组大鼠凋亡细胞比例均显著降低(P<0.01),电针干预组及药物干预组间无明显差异(P>0.05)。5干预12W后免疫荧光检测显示结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经GRP78和Caspase-12荧光强度明显增强;与模型对照组比较,电针干预组及药物干预组坐骨神经细胞GRP78和Caspase-12荧光强度明显减弱;电针干预组及药物干预组组间比较无显著差异。干预12W后,与正常对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经GRP78和Caspase-12表达显著增多(P<0.05);与模型对照组比较,电针干预组及药物干预组坐骨神经细胞GRP78和Caspase-12表达显著降低(P<0.05);电针干预组及药物干预组组间比较无显著差异(P>0.05)。结论:1本实验研究采用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制作糖尿病动物模型,糖尿病模型成模率高。模型大鼠与人类糖尿病症状表现类似,并且体重、热敏感度值均明显下降。“调脏通络”电针对改善实验大鼠体重、热敏感度值均有显著的效果,对改善血糖无明显效果。2“调脏通络”电针对改善糖尿病周围神经病变大鼠胫神经传导速度有明显效果。3“调脏通络”电针可以明显减轻糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经的病理损伤,从而发挥保护作用。4“调脏通络”电针可以明显降低糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经细胞凋亡比例,对坐骨神经起到一定的保护作用。5“调脏通络”电针可以明显减少坐骨神经内质网应激标志性蛋白GRP78和Caspase-12的表达,从而抑制内质网应激的发生,对坐骨神经起到保护作用。