烤烟中西柏三烯醇、糖苷类物质的检测及其与烟叶油润性的关系

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西柏三烯醇类物质是植物叶片腺毛分泌物的主要成分之一,具有重要的生物活性和实际用途。烟草中的西柏三烯醇作为香气的前体物,对卷烟制品的香吃味有很大影响。由于缺乏该类物质的标准品,迄今尚无文献报道该类物质的准确定量方法。因此有必要建立针对西柏三烯醇的定量方法,以便于对烟叶品质进行评估和控制。糖苷是烟草中重要的香味前体物,分析并探讨该类物质在烟草中的含量和分布状况,对于卷烟的生产和加工具有重要的理论指导意义。同时,油分是评估烟草品质的重要综合指标,而目前尚未能揭示烟草内部化学成分对油分的影响。研究影响烟叶油分的化学成分,可以为改进烟草植株的种植条件和提高卷烟制品的抽吸品质,提供切实有效的理论依据。本论文对烤烟中西柏三烯醇和糖苷类物质的提取及净化方法进行了详细的优化,结合GC-MS检测手段,建立了两类物质的准确定量方法。应用建立的方法对不同油分品质的烤烟样品进行测定,探究支配烟叶油分的内在化学成分,确定了上述两类物质对烟叶油润性的影响。在充分查阅中外文献的基础上,主要进行了下述研究工作:第一、将ASE方法与GC-MS-SIM检测方法相结合,发展了烤烟中西柏三烯醇类物质的准确定量方法。对新鲜烟叶表面的腺毛分泌物进行了浸提,再以硅胶柱对粗提取物进行了分离和富集,得到本实验中的西柏三烯醇工作样品。讨论了传统液-固萃取、索氏提取、超声辅助萃取及ASE等4种萃取方法对西柏三烯醇萃取效率的影响,结果显示使用ASE方法时,萃取效率最高。实验首次将ASE应用于烤烟中西柏三烯醇类的提取并优化了ASE的四个实验参数。样品的萃取液由GC-MS-SIM进行定性定量检测,消除了复杂基质的干扰,提高了分析的选择性和灵敏度。该法准确性高,各目标物的平均回收率范围为95.4%-97.3%,RSD均低于6.2%(n=5)。该法非常适用于不同烟草样品中西柏三烯醇类的准确、快速检测。第二、采用超声辅助萃取、C18SPE净化、酶解反应和GC-MS检测了烤烟中的14种糖苷的苷元。其中,SPE过程消除了烤烟中本身存在的游离态苷元对检测的干扰。以苯酚-β-葡萄糖苷作为标准物质,对SPE的淋洗和洗脱条件进行了优化。该方法准确性好,加标回收实验的回收率在96.7-102.5%之间,RSD均小于1.42%(n=5)。应用该方法对多个地区不同油分烤烟样品中的糖苷类物质进行了测定。测定结果首次揭示了烤烟中糖苷的含量与其油润性具有正相关关系。第三、采用ASE提取方法,结合GC-MS-SIM模式,对不同油分烤烟样品中的西柏三烯醇进行了定量检测,并对检测结果作数据统计及方差分析。结果显示:α-西柏三烯二醇在上部烟叶内的含量显著高于其在中部烟叶内的含量;β-西柏三烯二醇在上部烟叶内的含量也高于其在中部烟叶内的含量,但差异不显著。α-西柏三烯二醇在高油分烟叶内的含量显著地高于其在低油分烟叶内的含量,β-西柏三烯二醇的含量也呈现相同的规律,即二者的含量皆与烤烟的油润品质呈现明显的正相关关系。研究结果首次表明,西柏三烯醇类物质作为烟草腺毛分泌物及香味前体物的主要成分之一,对烟叶的油润品质有较大影响。
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