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研究目的PHF蛋白家族主要是含有PHD(Plant Homeodomain)结构域的锌指蛋白。具有植物同源结构域的锌指蛋白20(PHF20)是一个潜在的转录因子,它可以特异性识别甲基化的赖氨酸,并且是赖氨酸乙酰转移酶复合体MOF-NSL的一个亚基,催化组蛋白H4乙酰化和非组蛋白的乙酰化。研究表明PHF20的表达与乳腺癌的发生发展有着密切的关系,但是其分子机制并不是十分得清楚。因此,本研究旨在初步分析PHF20的相互作用蛋白,初步探索PHF20在肿瘤发生发展中的作用。研究方法1.通过免疫亲和纯化联合银染质谱的方法,确定可能与PHF20有相互作用的蛋白,再应用免疫共沉淀的实验方法对银染质谱结果进行验证。2.对质谱得到的相互作用蛋白进行KEGG分析、PPI分析和GO分析,寻找PHF20相互作用蛋白参与的表观遗传转录调控相关的信号通路。3.利用乳腺癌细胞系进行体外实验,包括EDU检测细胞增殖和Transwell实验检测细胞侵袭。4.使用TCGA数据库、GEO数据库、GEPIA分析和KM-plot生存分析,进一步探究PHF20与恶性肿瘤的关联性。结果1.PHF20可以与KDM4A、EZH2、EED和Rb Ap46/48特异性结合,发挥表观遗传调控作用。2.PHF20相互作用蛋白参与许多表观遗传转录调控相关的信号通路,如:染色质组装、组蛋白修饰、基因表达调控等,PHF20相互作用网络中包含了许多表观遗传相关的复合物,如Nu RD复合物、Pc G复合物、MLL复合物和DNA损伤修复复合物等。3.Ed U和转移小室实验表明,干扰PHF20的表达后与对照细胞相比,其增殖和侵袭能力显著降低。4.临床数据分析表明PHF20在多种肿瘤组织中高表达,并与不良预后相关。结论我们的研究首次发现PHF20在体内与多种表观遗传调控相关的复合物相互作用,并促进肿瘤细胞增殖和侵袭的能力。首次发现PHF20在乳腺癌和多种肿瘤组织中高表达,提示PHF20可能是一个潜在的肿瘤标记物,为乳腺癌以及其它肿瘤的诊断和治疗提供了一个新的靶点。