【摘 要】
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猪瘟是造成养猪业严重经济损失的动物传染病,我国将其列为法定的一类动物疫病。猪感染猪瘟是由猪瘟病毒引起的,自然条件下仅发现猪感染猪瘟病毒。猪瘟病毒是黄病毒科瘟病毒属的
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猪瘟是造成养猪业严重经济损失的动物传染病,我国将其列为法定的一类动物疫病。猪感染猪瘟是由猪瘟病毒引起的,自然条件下仅发现猪感染猪瘟病毒。猪瘟病毒是黄病毒科瘟病毒属的成员,属于正链RNA病毒,与其他瘟病毒属成员在基因组结构和病毒特性方面具有很高的相似性。猪感染后,引起白细胞减少、免疫抑制,同时表现出内脏器官严重出血,急性发病通常引起猪的死亡,严重威胁着猪的生命健康。
本实验通过反转录PCR对从广西境内收集临床上疑似CSF的72份组织病料进行初步诊断,结合核苷酸BLAST比较、病毒分离、间接免疫荧光检测,最终获得两株CSFV:GXXJ分离株和GXlX09分离株。对GXlX09分离株全基因组序列以及GXXJ分离株的囊膜糖蛋白序列进行遗传进化树分析和核苷酸及推定氨基酸同源性分析,发现GXlX09分离株与GXXJ分离株均属于2.1亚群。同源性比较结果显示,GXlX09分离株与94.4IL94-TWN株核苷酸同源性最低,为82.9%,与Paderborn株同源性最高,为93.4%;开放阅读框ORF的推定氨基酸同源性比较结果显示,GXlX09分离株与LPC株同源性最低,为91.0%,与Paderbom株同源性最高,为97.7%。E2、NS5A、NS5B基因核苷酸和糖蛋白核苷酸序列构建的遗传进化树与全基因核苷酸序列构建的遗传进化树最为接近,适于CSFV基因分群。关键氨基酸位点比较结果表明,GXXJ分离株、GXlX09分离株除了在476R突变为476S,GXlX09分离株在L771突变为1771, N777突变为T777,GXXJ分离株在N777突变为s777外,其他没有发生突变。应用RNAstructure5.03软件对GXlX09分离株的5UTR和3UTR的RNA二级结构进行预测,发现Shimen标准株、HCLV株、GXWZ02株、GXlX09分离株的5UTR二级结构相似,它们形成的茎环结构主要差异在30~150 nt和270~298 nt;而它们的3’UTR二级结构均由4个茎环结构组成。我们还测定了GXXJ分离株和Shimen标准株在细胞上的生长曲线,GXXJ分离株在感染细胞后的24 h内,并没有出现病毒的复制,而Shimen株在感染细胞后的12 h即开始了病毒复制;同时,GXXJ分离株在感染细胞后的24h~48 h之间出现病毒的急剧增长,增长速率高于Shimen标准株。
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