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大剂量糖皮质激素的应用是引起骨坏死(ONFH，osteonecrosis of the femoral head)最常见的原因之一。在SARS(严重急性呼吸窘迫综合症，Severe acute respiratory syndrome，SARS)流行期间，由于使用大剂量的糖皮质激素(corticosteroid，以下简称激素)，有近30％的SARS患者出现早期骨坏死。骨微循环损伤、血流瘀滞、血液高凝状态是造成骨坏死的3个主要因素。因此，研究大剂量激素引起骨微循环内皮细胞损伤的机制并寻找对这种损伤具有保护作用的药物对激素性股骨头坏死的防治具有重要意义。目的：应用分离纯化的人股骨头骨微血管血管内皮细胞(Human bone microvascular endothelial cell，HBMEC)在体外建立糖皮质激素损伤的细胞模型，并利用这一细胞模型筛选对激素引起HBMEC损害具有保护作用的药物。方法：应用UEA-1结合的磁珠分离和纯化HBMEC并进行鉴定：在体外建立糖皮质激素杀伤HMEC的细胞模型模型；用MTT法、台盼蓝染色及TUNEL方法确定细胞损伤的类型。比较分析不同SARS患者血清对糖皮质激素诱导的HBMEC损害的影响；应用RT-PCR、Western Blot和免疫组化方法检测SARS-CoV相关受体ACE2及CD209L在HBMEC的表达。比较评价不同药物PGE1、7643(丹参提取的单体)、那曲肝素、依诺肝素、丹参、川芎嗪、大蒜素等对糖皮质激素诱导的HBMEC损害的保护作用。结果：应用UEA-1磁珠分离纯化的HBMEC表现单层生长和接触抑制的特性；免疫荧光染色证实这些细胞表达VWF，CD31，CD34并摄取低密度脂蛋白。将HBMEC与不同剂量的糖皮质激素共同孵育，可以直接导致HBMEC损伤，并表现明显的剂量和时间依赖性。这些损伤的细胞可以被台盼蓝染色而TUNEL染色阴性，表明细胞坏死是损伤主要类型。SARS患者血清单独不对HBMEC造成损伤，但可明显增加HBMEC对糖皮质激素的杀伤敏感性。免疫细胞化学和Western Blot证实：HBMEC表达两种SARS病毒受体ACE2和CD209L．应用糖皮质激素诱导HBMEC损伤的细胞模型，我们发现PGE1、764-3、丹参、川芎嗪对糖皮质激素诱导HBMEC损害具有明显的保护作用。结论：糖皮质激素会对HBMEC具有直接损伤作用，而细胞坏死是造成损伤的主要方式。SARS患者血清可以明显增加HBMEC对激素的杀伤敏感性。PGE1、764-3、丹参、川芎嗪对激素诱导的HBMEC损伤具有保护作用。背景皮质类固醇性股骨头坏死的自行修复能力有限可能与这些患者股骨头颈及股骨干骺端骨髓基质干细胞数量少，增殖活性弱有关。检测此类患者骨髓基质干细胞的数量与增殖活性，为建立自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死的合理性寻求证据。材料与方法2005年2月～2005年5月18例皮质类固醇性股骨头坏死病例(ARCO分期Ⅱ，ⅢA)。其中男性7例，女性11例，平均26.9岁(21-36岁)，激素(折合成甲强龙)使用量平均3414.86mg(123-8335mg)，使用激素时间平均27.1d(3-40d)，均否认有酒精等其他骨坏死易感因素暴露史；对照组：无股骨头坏死，无激素应用的拟行人工关节置换的股骨颈骨折患者11例，其中男性3例，女性8例，平均60岁(55～85岁)。在患者知情同意条件下，手术抽取股骨头颈部骨髓血3～5ml。用密度梯度离心法分离骨髓基质干细胞，再经贴壁筛选法筛选，对第3代骨髓基质干细胞，用MTT法、流式细胞仪法测定细胞生长增殖水平及细胞周期。结果用密度梯度离心和贴壁筛选法法，可以得到纯化的骨髓基质干细胞；MTT结果显示对照组的hMSCs增殖能力明显比病例组强。股骨头坏死组培养细胞在种植后1～7d为生长滞留期，第8d达到对数生长期，以后进入到平台期，对照组较病例组生长曲线明显前移，并且峰值增高。流式细胞仪测定的细胞周期结果显示，股骨头坏死组G0／G1细胞比例明显高，而S+G2／M期细胞比例低，PI值较对照组降低，两者差异有显著性意义(P＜0.05)。这说明皮质类固醇性股骨头坏死患者股骨近端的MSCs增殖活性是下降的。结论皮质类固醇性骨坏死的修复慢可能与患者股骨干近端骨髓基质干细胞增殖活性下降有关。皮质类固醇可能是通过降低了股骨头骨髓基质干细胞的增殖活性或增殖分化能力及改变其分化方向而引起骨坏死的。