GeXP-PCR技术多重检测食品转基因成分和HPV分型感染

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目的:建立基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的多重PCR方法,并评价其在食品转基因成分的检测和人乳头瘤病毒HPV分型检测中的初步应用。方法:以转基因大豆和转基因菜籽中的转基因成分为研究对象,利用GeXP系统建立多重PCR方法,同时检测六种外源转基因成分(PAT,NOS, CaMV35S, FMV35S,Bar,EPSPS),并与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》进行结果比较。以中国人常见的五种人乳头瘤病毒(HPV6,11,31,33和52)亚型为研究对象,建立基于GeXP系统的五重PCR方法,并对其进行方法学评价(包括灵敏度、特异性等),并与商业化试剂盒检测结果进行比较。结果:在大豆和菜籽的转基因成分检测中,我们成功建立了可同时检测六种外源基因(PAT,NOS, CaMV35S, FMV35S,Bar,EPSPS)的多重PCR体系。在该体系中,我们采用100ng模板量(该量为行标中建议的模板最低量),检测结果与行标建议的荧光PCR检测结果完全一致。在人乳头瘤病毒HPV的分型研究中,我们成功建立了可同时检测中国人常见的五种HPV亚型(包括两种低危型HPV6,HPV11和三种高危型HPV31,HPV33,HPV52)的五重PCR体系。该方法特异性好,检测灵敏度可达103拷贝/μL。通过对30份临床标本验证,结果与商业化试剂盒检测结果完全一致。结论:成功建立了一种新的基于GeXP的多重PCR技术平台,并用于食品中转基因成分检测和HPV分型检测,这为实现高通量、多靶基因的检测提供了新的思路和方法。
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