【摘 要】
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油酸因其特有的生物学特性,而极具经济价值,成为当前油菜育种热点。目前“双低”油菜品种已广泛种植。在“双低”油菜种子中,以油酸为前体的碳链延长途径经多年的常规育种选
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油酸因其特有的生物学特性,而极具经济价值,成为当前油菜育种热点。目前“双低”油菜品种已广泛种植。在“双低”油菜种子中,以油酸为前体的碳链延长途径经多年的常规育种选择已经被逐步切断,而去脂肪酸去饱和途径所形成亚油酸、亚麻酸在菜籽油中仍然占有一定比重。为进一步提高油酸的含量,降低非油酸类脂肪酸(棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸)的比重,得到新的高油酸油菜种质资源。本研究克隆了Fad2、Fad3、Fatb基因的保守序列,长度分别为347bp、394bp口359bp。运用重组PCR的方法将三个基因的保守序列体外融合为一条长度为1100bp共干扰DNA片段,然后将这个片段正反向插入由种子特异性启动子Napin引导的RNA干扰载体PFGC5941中,转化甘蓝型油菜中双9号,对三个基因进行沉默抑制,来切断其相关的合成途径。在16mg/L的PPT选择压力下,共得到757株抗性苗,其中PCR检测出64株转基因植株。转基因油菜生长力弱,出现着大面积的死亡,并伴随着不花不育等现象,至成熟期共收获得到5株转基因TO代油菜种子。采用荧光定量PCR和气象色谱的方法对转基因种子中的Fad2、Fad3、Fatb基因表达分析及脂肪酸组分测定。结果表明,Fad2、Fad3、Fatb基因表达抑制率达99%以上;油酸含量较对照相比增长21.77%。初步达到实验目的,为脂肪酸合成代谢机理研究提供参考。
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