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目的: 本课题从安全性和药效的角度评价水蒸气蒸馏法(SD)和超临界萃取法(SFE)提取干姜挥发油的优劣,初步探求其抗炎机制并对比两种提取方法是否存在差异。 方法: 1.运用正交设计的实验方法对干姜挥发油的SD法和SFE法工艺进行优化,并采用气相质谱联用仪(GC-MS)进行化学成分分析。 2.比较两种挥发油的急性毒性,计算LD50及95%可信区间,并记录其毒性症状,死亡速率及体重变化。 3.复制脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺部炎症(ALI)模型,对SFE和SD两种方法得到的干姜挥发油进行抗炎活性的比较,并采用Elisa法,测定前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白三烯-B4(LT-B4)、白介素-8(IL-8)的浓度来探求其抗炎机制。 结果: 1.SD法的最佳提取工艺为:粒径大小60目,加水量12倍,提取时间5h,提取率为0.97%。通过GC-MS对SD法提取的挥发油进行分析,共得到了91种成分,与现有数据库对比鉴定了其中41种。 2.SFE法的最佳提取工艺为:粒径大小10~30目,萃取压力25 MPa,萃取温度55℃,提取时间2h,提取率为3.00%。通过GC-MS对SFE法提取的挥发油进行分析,共得到了108种成分,鉴定了其中36种。 3.小鼠主要中毒症状为腹部刺激,呼吸急促等。死亡时间多集中在8h以内。干姜经超临界萃取提取的挥发油LD50=6.717 mL/kg(4.066-8.108 mL/kg),折算生药为LD50=223.9 g/kg(135.5-270.3 g/kg);经水蒸气蒸馏法提取的挥发油LD50=9.111 mL/kg(8.133-10.206 mL/kg),折算生药为LD50=1012.3 g/kg(903.7-1134.0 g/kg)。 4.两种方法提取的干姜挥发油对LPS诱导的ALI均有不同程度疗效,其中在抑制TNF-α因子的释放上,SD组优于SFE组,在抑制IL-8,PGE2及LT-B4因子的释放上,SFE组优于SD组。 结论: SD和SFE的提取工艺以萃取率为指标优化后具有良好的稳定性和可行性。对比两种方法提取的干姜挥发油化学成分大体一致,SFE组萃取率高且成分多而杂。对比两种方法提取的干姜挥发油LD50可以得出,干姜挥发油属于无毒性,且SD组安全性高于SFE组。对比两种方法提取的干姜挥发油对LPS诱导的ALI均有不同程度的疗效,且SFE组疗效优于SD组。