【摘 要】
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核型分析是指对细胞的染色体表型特征进行分析,包括染色体的形态、数目、大小、带型等内容的研究。核型分析作为真菌分类及遗传研究的重要手段,它为真菌的进化与分类、染色体结构、形态与变异以及基因定位等提供了重要的研究基础和理论。灰黄青霉属子囊菌门真菌,能产生灰黄霉素等多种次级代谢物。迄今为止有关灰黄青霉的染色体核型信息仍是空白。明确灰黄青霉染色体核型有助于更好地开发利用该菌,研究相关基因表达的调控模式,为
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核型分析是指对细胞的染色体表型特征进行分析,包括染色体的形态、数目、大小、带型等内容的研究。核型分析作为真菌分类及遗传研究的重要手段,它为真菌的进化与分类、染色体结构、形态与变异以及基因定位等提供了重要的研究基础和理论。灰黄青霉属子囊菌门真菌,能产生灰黄霉素等多种次级代谢物。迄今为止有关灰黄青霉的染色体核型信息仍是空白。明确灰黄青霉染色体核型有助于更好地开发利用该菌,研究相关基因表达的调控模式,为更好地调控灰黄霉素的合成奠定基础。目前,在青霉属真菌鉴定与分类上,一些青霉属真菌命名较为混乱,其中有些名称是不完整和无效的,或者一些名称是其他物种的同名。本研究的研究对象为灰黄青霉D-756（异名:展青霉D-756）,源于吴松刚等利用野生菌展青霉Penicillum patulum 4541（系灰黄青霉Penicillium griseofulvum的异名）作为原始出发株,历经物理化学复合诱变十多轮所得。为了获得灰黄青霉的核型信息以及进一步明确灰黄青霉的分类关系。本研究进行了如下工作:1.灰黄青霉4541的细胞学核型的确定:采用传统的胚芽管爆裂法制片和改进的胚芽管爆裂法制片,通过增加制片数量,对灰黄青霉4541染色体进行可视化观察,并确定了灰黄青霉4541的染色体数量为5条并且获得了高度浓缩的有丝分裂的染色体形态图。2.灰黄青霉D-756和米曲霉FS1125细胞学核型的确定:采用改进的胚芽爆裂法制片,对灰黄青霉D-756和米曲霉FS1125的染色体进行可视化观察,确定了灰黄青霉D-756和米曲霉FS1125的染色体数量分别为5条、8条,分别获得了高度浓缩的有丝分裂的染色体形态图,也证明了染色体数目在种间差异明显大于种内差异。比较突变株灰黄青霉D-756与其原始出发菌株4541的染色体核型,结果显示其染色体数目相同,但其中最小的一条染色体的相对长度有显著差异（P＜0.05）。3.对灰黄青霉野生株4541、突变株D-756以及野生株灰黄青霉40393初步进行了宏观形态学观察,结果表明灰黄青霉原始野生菌株4541经过十多轮的物理化学诱变,形态上发生了明显的变异,突变株灰黄青霉D-756的孢子颜色呈白色,而原始野生出发菌株4541及另一野生灰黄青霉40293孢子颜色均为灰绿色。克隆了灰黄青霉野生株4541、突变株D-756以及野生株40393的β-微管蛋白以及钙调蛋白基因序列并测序。结果表明突变株D-756的β-微管蛋白基因序列与其出发菌株4541及参考菌株灰黄青霉40293β-微管蛋白基因有3～4个碱基的差异,突变株D-756的钙调蛋白基因序列与其出发菌株4541及参考菌株灰黄青霉40293钙调蛋白基因有7～8个碱基的差异,均属于种内差异。将三个菌株的β-微管蛋白和钙调蛋白基因序列分别在Gen Bank数据库中进行同源性检索,并构建NJ系统发育树。系统发育分析表明这3株菌株与灰黄青霉进化关系最近。
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