从原核生物的细菌到真核生物的人类，当接触高温或其他应激因素时，可以合成一组被称为热应激蛋白(heat stress proteins，HSPs)的蛋白质。HSPs具有使细胞或生物从各种应激中恢复和保护它们免遭应激因素损害的功能，此外，HSPs还具有分子伴侣的功能。HSP在进化过程中有高度保守性，其多态性可能与疾病或机体遭受再次应激的易感性或耐受性有关，其中最重要、研究最多的是HSP70。HSP70-1和HSP70-2和HSP70-hom基因一起定位于6p21.3区MHC Ⅲ类分子内，可能与多种疾病有关。 尽管人们研究了多种疾病与HSP70基因多态性间的关系，但是HSP70基因多态性在缺氧所引起的高原反应中的意义和作用尚未见相关报道。本研究首次进行了这方面的研究与探讨。 为探讨HSP70基因多态性与高原反应间的关系，本研究选武警战士为研究对象，应用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性(polymerase chain reaction—restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)分析方法研究了战士中HSP70-1、HSP70-2及HSP70-hom的基因多态性。其中72名为高原反应组，173名为对照组。 结果表明，HSP70-1的多态性在两组间并无区别：而HSP70-2 B／B郑州人学2003届博!:论文特定人群HS丙O华因多态队及伉原杭沐水平的川}·究基因型频率在高原反应组明显高于对照组(p<0.05);HsP7o一hom刀A基因型的频率在高原反应组也明显高于对照组，差异有显著性(p<0 .05)。 本研究表明某些特定基因型(如HSP7O一2 B/B基因型和HSP7O一homA/A基因型)可能与高原反应有关，这有助于在特定职业人群中发现和保护这些个体，为保障健康、提高效率提供科学依据。 低温作业属于物理因素中的不良气象条件，长期从事低温作业可对人的心血管系统、免疫系统、中枢神经系统以及骨关节产生危害，产生一些相关疾病。近年来虽然对各种职业病的研究越来越详细与深入，但对于低温作业导致的危害及其机制研究相对较少。而随着经济的进步，冷冻冷藏保鲜业也在高速发展。大量人员在低温环境下从事作业，这些人群中热应激蛋白及其抗体是否发生相应改变，也是值得探讨的问题。 本研究选取江苏省某县冷库作业工人为研究对象，其中保鲜冷库 (O℃组)53人，水产冷库(一20℃组)53人，另选年龄、性别、劳动强度与之匹配的，不从事有毒有害职业的村民58人作为对照。用W已Stem blot法检测淋巴细胞HSP70抗原水平，用W己ste二blot一ELISA法研究血浆中热应激蛋白抗体表达水平，另外用试剂盒检测了血浆中SOD、GSH、MDA、NO、NOS等生化指标，来探讨低温作业对人可能的危害与机制。 研究发现:O℃组和一20℃组分别与对照组相比，其淋巴细胞HSP70水平明显增高，差异有显著性(p<0.05)。OOC组与一20OC组相比，HSP7O水平差异没有显著性(p>0.05)。血浆HSP70抗体对照组58人中有3人出现卜10阳性，阳性率为5%:而O’C组53人中有郑州人学2003届博卜论文特定人群HSP7O华因多态性及杭原抗体水平的研究58人中有3人出现1:10阳性，阳性率为5%;而O℃组53人中有14人阳性，占26%;一20’C组53人有n人出现阳性(21%)。对照组1人出现l:20阳性(2%)，OOC组有8人阳性，占15%;一20’C组也有8人出现阳性(巧%)。O“C组与一20℃组分别与对照组相比，其血浆HSP7o抗体水平明显增高，差异有显著性(p<0.05)。此外，O℃组与一20℃组中还各有一人出现1:40阳性，而对照组没有检出。0’C组与一20℃组相比，HSP70抗体水平差异没有显著性(p>0.05)。对于各生化指标，0℃组与一20℃组分别与对照组相比，其血浆中SOD活性、GSH含量均下降，差异有显著性(p<0.05);而MDA含量、NO含量和NOS活性均增高(p<0 .05)。0℃组与一20 OC组相比，各指标差异均无显著性。 结果显示:在冷作业工人中存在着热应激蛋白的高表达，低温环境作为一种应激因素，可使体内热应激蛋白合成与表达增加。而血浆中抗体水平的升高可能是由于冷应激时脂质过氧化程度加重，损伤了细胞膜结构或功能，使细胞内HSP7O释放入血液，从而使抗体水平相应升高，HSP7O有望成为职业危害的生物标志物。 HSP7O是一个多基因家族，编码的是一组高度相关的蛋白质，每一种蛋白质成分在疾病或应激中的作用也不尽相同。如何将这些高度相关的蛋白质分离开来并分别进行研究是当前所面临的重要课题，这就要求将新的技术应用于HSP7O的分析中来，其中的关键技术就是双向聚丙烯酞胺凝胶电泳(two一dimensional polyae理lamide gelelectroPhoresis，2一D队GE)。而目前关于HSP70蛋白多态性的研究多针对动物，其结果难以简单外推到人。因此本研究使用双向电泳技术来分离人体细胞中的蛋白质组成分，并用特异性的抗体鉴定其中的郑州人学2003届博l:论文特定人群HSP70纂因多态性及抗原抗沐水平的研究HSP7O。经过反复摸索后发现，样本制备是其中最重要的环节。。本试验使用了两种蛋白酶抑制剂，从而有效地保障了蛋白成分不被消化。对试验中的一些关键环节进行了优化，发现适当延长等电聚焦电