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目的本研究以高糖高脂饲养联合小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导的糖尿病大鼠为实验对象,以雷公藤多苷(Tripterygium Wilfordii Polyglucoside TWP)为治疗药物,探讨不同剂量雷公藤多苷对糖尿病肾病的预防及早期治疗对减少糖尿病肾病大鼠蛋白尿的疗效,雷公藤多苷对肾脏巨噬细胞浸润及相关细胞因子NF-κB、MCP-1表达的影响及可能的作用机制。方法清洁级雄性SD大鼠136只,随机选取16只分为预防正常对照组(PNC组)、治疗正常对照组(TNC组),每组8只,饲以常规饲料；其余120只大鼠以高糖高脂饲料喂养4周联合小剂量STZ (30mg/kg)尾静脉注射建立T2DM模型,将成模大鼠随机分为预防模型对照组(PDM组)、预防雷公藤多苷低剂量组(PTL组,6mg/kg)、预防雷公藤多苷中剂量组(PTM组,12mg/kg)、预防雷公藤多苷高剂量组(PTH组,24mg/kg)及治疗模型对照组(TDM组)、治疗雷公藤多苷低剂量组(TTL组,6mg/kg)、治疗雷公藤多苷中剂量组(TTM组,12mg/kg)、治疗雷公藤多苷高剂量组(TTH组,24mg/kg),每组15只。预防组于DM成模后即开始灌胃,灌胃4周后处死；治疗组于DM成模后第5周开始灌胃,第8周末处死；PNC、TNC组和PDM、TDM组以等量蒸馏水灌胃。观察大鼠一般情况、血糖、肾重/体重、肝肾功能、血脂、血常规、24h尿蛋白的变化；光镜、电镜观察肾脏病理及超微结构的变化；通过RT-PCR和免疫组化法分别从基因水平和蛋白水平探讨细胞因子NF-κB、MCP-1在肾脏的表达情况,并通过RT-PCR及免疫组化法观察巨噬细胞表面标记蛋白CD68的表达情况,明确巨噬细胞及NF-κB、MCP-1在DN中的作用以及雷公藤多苷治疗的影响和可能机制。结果1.预防及治疗组实验大鼠,与对照组相比,糖尿病模型大鼠均表现为血糖升高、体重下降、肾重/体重的比重增加(P<0.05),雷公藤多苷干预治疗后血糖及体重较糖尿病模型组无明显变化,肾重/体重较模型组均有所降低,其中雷公藤多苷给药中剂量组降低最明显。2.肝肾功能：预防组实验大鼠中PTH组AST水平较PNC、PDM、PTL及PTM组明显升高(P<0.05),各组间ALT、SCr、BUN水平比较无统计学差异(P>0.05),治疗组实验大鼠中AST、ALT、SCr、BUN水平比较均无统计学差异(P>0.05)。血常规：预防组实验大鼠中各组间WBC、RBC、Hb、PLT、LYM、 MONO及NEUT水平比较无统计学差异(P>0.05),治疗组实验大鼠中雷公藤多苷给药后各组的LYM水平均较TNC组下降(P<0.05)，WBC、RBC、Hb、 PLT、MONO及NEUT水平比较无统计学差异(P>0.05)。血脂：高糖高脂饲料喂养组大鼠造模前TG、TC水平明显高于PNC、TNC组(P<0.05),预防及治疗组雷公藤多苷给药各组TG、TC均较模型对照组有所降低(P<0.05),三组间无统计学差异(P>0.05)。3.24小时尿蛋白结果与PNC、TNC组相比,PDM、TDM组大鼠UMA明显升高(P<0.05)；与PDM组相比,雷公藤多苷预防组干预后UMA有不同程度降低,其中PTM组下降最明显(P<0.05), PTL组次之(P<0.05),PTH组降低不明显(P>0.05)；与TDM组相比,雷公藤多苷治疗组给药后UMA均明显降低(P<0.05),以TTM组下降最明显。4.光镜4.1预防组：PNC组大鼠肾小球、肾小管及肾间质未见明显异常。PDM组大鼠可见肾小球轻度萎缩,系膜细胞轻度增生,肾小球毛细血管基底膜增厚,肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性等DN的肾脏病理改变,雷公藤多苷干预后各组上述病理性改变均有所改善,其中PTM组改善最明显。4.2治疗组：TNC组大鼠肾小球、肾小管及肾间质未见明显异常。TDM组大鼠可见肾小球萎缩,系膜区弥漫性增宽,肾小球毛细血管基底膜增厚,肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性、间质可见多量纤维组织灶性增生等DN的肾脏病理改变。雷公藤多苷给药后各组上述病理性改变均有所改善,其中TTM组改善最明显。5.电镜5.1预防组：PNC组肾小球及肾小管均未见异常。PDM组肾小球基底膜增厚,足突融合,足细胞膜破裂；肾小管基底膜增厚断裂,线粒体扩张、嵴断裂。雷公藤多苷干预后,上述病理改变均较PDM组减轻,其中PTM组病理改变减轻最明显。5.2治疗组：TNC组肾小球及肾小管均未见异常。TDM组大鼠肾小球基底膜明显增厚,足突融合,足细胞细胞膜破裂；肾小管基底膜不规则增厚,线粒体嵴断裂,结构模糊,细胞质内见大量吞饮泡(Pt),细胞膜边界不清。雷公藤多苷给药后,上述病理改变均较TDM组减轻,其中TTM组病理改变减轻最明显。6.免疫组化及RT-PCR:CD68、NF-κB、MCP-1在肾小球及肾小管中均有表达,CD68主要表达于肾小球区域,NF-κB及MCP-1主要表达于肾小管区域。6.1预防组：与PNC组相比,PDM组CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表达水平明显升高(P<0.05)。与PDM组相比,雷公藤多苷干预各组CD68、NF-κB. MCP-1表达水平下降(P<0.05),其中PTM组下降最明显。6.2治疗组：与TNC组相比,TDM组CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表达水平明显升高(P<0.05)。与TDM组相比,雷公藤多苷给药各组CD68、 NF-κB、MCP-1表达水平下降(P<0.05),其中TTM组下降最明显。结论1.成功制备DN模型,血糖、血脂水平、24h尿蛋白特点及肾脏病理变化符合人类T2DM及DN的特点及病理变化。2.预防性给予雷公藤多苷药物干预可有效延缓DN的发生发展,DN早期及时给予雷公藤多苷治疗,可减少24h尿蛋白,有效延缓DN的进展。3.应用低、中剂量雷公藤多苷能够预防和治疗早期DN,具有较高安全性,雷公藤多苷高剂量(24mg/kg/d)可能会引起肝肾毒性,临床应用雷公藤多苷要注意控制药量,密切观察副作用。4.糖尿病大鼠肾脏组织巨噬细胞浸润及相关因子NF-κB、MCP-1的表达水平明显上调,雷公藤多苷可改善巨噬细胞在肾脏的浸润及相关细胞因子的表达。5.预防组及治疗组均提示雷公藤多苷中剂量组(12mg/kg/d)对于减小24h尿蛋白,改善肾脏病理改变及巨噬细胞在肾脏的浸润及相关细胞因子的表达效果最显著。