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目的:通过建立小鼠全脑缺血再灌注损伤（GCI/R）模型和小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3）氧糖剥夺再复氧（OGD/R）模型,探讨24-乙酰泽泻醇A通过miR-92a-3p/SIRT1保护b End.3细胞改善脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:1.动物实验:24-乙酰泽泻醇A改善小鼠全缺血再灌注损伤的作用研究10周龄的WT小鼠随机分为3组,假手术组（sham组）、全脑缺血再灌注组（GCI组）和全脑缺血再灌注+24-乙酰泽泻醇A组（GCI+24A组）,每组10只;sham组只分离颈总动脉不结扎,GCI组和GCI+24A组行双侧颈总动脉结扎20min再灌注;术后1天采用m NSS改良神经功能缺损评分评估小鼠的神经损害情况,并且GCI+24A组开始予以24-乙酰泽泻醇A溶液,其余组予以同体积生理盐水,每日1次,连续7天;术后第8天进行新物体识别实验检测各组小鼠空间探索能力和学习记忆能力;运用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力;免疫荧光检测脑组织CD31的表达;Western blot法检测各组小鼠脑组织SIRT1、内皮细胞紧密连接蛋白、TNF-α、IL-1β、NF-kB、Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化;qRT-PCR法检测各组小鼠脑组织中SIRT1 mRNA和miR-92a-3p表达水平。2.细胞实验:24-乙酰泽泻醇A通过miR-92a-3p/SIRT1改善OGD/R诱导b End.3细胞损伤的作用研究双荧光素酶实验明确SIRT1和miR-92a-3p的关系;构建脑微血管内皮细胞OGD/R损伤细胞模型,同时进行miR-92a-3p mimics转染,将b End.3细胞分为对照组、OGD/R组、OGD+24A组、OGD+24A+92a mimics组和OGD+24A+mimics NC组;CCK8法检测各组细胞活力的变化;渗透性实验检测各组细胞通透性的变化;划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化;qRT-PCR法检测各组细胞SIRT1、TNF-α、IL-1β、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的变化;Western blot法检测各组细胞SIRT1、TNF-α、IL-1β、NF-kB、Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化。结果:1.动物实验:24-乙酰泽泻醇A改善小鼠脑缺血再灌注损伤1)术后第1天改良神经功能缺损评分GCI组和GCI+24A组无统计学差异（P＞0.05）,分数随着时间推移呈下降趋势,术后第7天sham组和GCI+24A组评分均显著低于GCI组（P＜0.01）,说明24-乙酰泽泻醇A可改善神经功能缺损程度。2)新物体识别实验1h和24h测试,与sham组相比,GCI组辨别指数均降低（P＜0.01）,而GCI+24A组较GCI组比辨别指数升高（P＜0.01）。结果提示,24-乙酰泽泻醇A可明显改善小鼠空间探索能力和学习记忆能力。3)Morris水迷宫结果显示定向航行实验中,与sham组相比,GCI组逃避潜伏期延长（P＜0.05）,与GCI组相比,GCI+24A组逃避潜伏期缩短,差异有统计学意义（P＜0.05）;空间探索实验中,与sham组相比,GCI组穿越平台次数显著减少（P＜0.01）,GCI+24A组与GCI组比较,穿越平台次数增加（P＜0.01）。上述结果提示24-乙酰泽泻醇A改善小鼠学习记忆能力。4)CD31免疫荧光结果显示,全脑缺血再灌注损伤首要损害脑微血管内皮细胞,而24A干预后脑微血管内皮细胞损伤明显改善;Western blot结果显示,与sham组比,GCI组ZO-1、occludin和claudin-5表达量下降（P＜0.01）,与GCI组比较,ZO-1、occludin和claudin-5表达量升高（P＜0.01）。说明GCI/R损伤后累及脑微血管内皮细胞,引起TJs功能紊乱。5)Western blot结果显示,与sham组比,GCI组SIRT1表达量减少、Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.01）,而p-p65/p65比值上升、TNF-α和IL-1β蛋白表达量增多（P＜0.01）;与GCI组相比,GCI+24A组SIRT1表达量增多、Bcl-2/Bax比值上升（P＜0.01）,而p-p65/p65比值下降、TNF-α和IL-1β蛋白表达量减少（P＜0.01）（P＜0.01或P＜0.05）。说明24-乙酰泽泻醇A促进ZO-1、occludin、claudin-5、SIRT1表达,抑制NF-kB信号通路,起到抗炎、抗凋亡作用。6)qRT-PCR结果显示,与sham组比较,GCI组SIRT1 mRNA表达水平下降,miR-92a-3p表达水平显著升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）;GCI+24A与GCI组比较,结果反之。2.细胞实验:24-乙酰泽泻醇A通过miR-92a-3p/SIRT1改善OGD/R诱导b End.3细胞损伤的作用研究1)双荧光素酶报告基因实验结果提示SIRT1是miR-92a-3p的靶基因之一。2)CCK8检测结果显示,OGD/R组、OGD+92a mimics NC组相比,细胞活力接近,表明转染试剂对OGD/R损伤无影响。与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显下降（P＜0.01）;与OGD/R组相比,OGD+24A组的细胞活力升高（P＜0.01）;与OGD+24A组比较,OGD+24A+92a mimics组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义（P＜0.01）,而OGD+92a mimics NC组与OGD/R组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。上述结果表明,24-乙酰泽泻醇A可改善OGD/R引起细胞活力下降,而miR-92a-3p mimics将24-乙酰泽泻醇A的作用抵消。3)渗透性实验结果显示,与对照组相比,OGD/R组细胞通透性明显增加,差异有统计学意义（P＜0.01）;与OGD/R组相比,OGD+24A组细胞通透性降低（P＜0.01）;与OGD+24A组比较,OGD+24A+92a mimics组的细胞通透性明显升高（P＜0.01）,表明转染miR-92a-3p后,24-乙酰泽泻醇A的改善作用被逆转。4)划痕实验结果显示,与对照组相比,OGD/R损伤后明显抑制细胞迁移能力（P＜0.01）;与OGD/R组比较,OGD+24A组细胞迁移能力明显改善（P＜0.01）;而与OGD+24A组对比,OGD+24A+92a mimics组细胞迁移能力显著下降（P＜0.01）。5)RT-q PCR检测结果显示,OGD/R损伤后b End.3细胞TNF-α、IL-1β和Bax mRNA表达水平较对照组上升,SIRT1、Bcl-2 mRNA表达水平较OGD/R组呈下降趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）;与OGD/R组相比,OGD+24A组TNF-α、IL-1β和Bax mRNA表达水平下调,而Bcl-2 mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。6)Western blot结果显示,与对照组相比,OGD/R组细胞SIRT1表达量下降,TNF-α和IL-1β表达量上升,Bcl-2/Bax比值降低,p-p65/p65比值升高,差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）;相较于OGD/R组,OGD+24A组细胞SIRT1表达量升高,TNF-α和IL-1β表达量降低,Bcl-2/Bax比值上调,p-p65/p65比值降低（P＜0.05）;与OGD+24A组比较,OGD/R+24A+92a mimics组细胞SIRT1表达量减少,TNF-α和IL-1β表达量增多,Bcl-2/Bax比值下调,p-p65/p65比值上调,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论:24-乙酰泽泻醇A通过抑制miR-92a-3p表达促进SIRT1表达,以减轻炎症反应和细胞凋亡水平,从而改善小鼠神经功能、空间探索能力和学习记忆能力,保护脑微血管内皮细胞,达到改善脑缺血再灌注损伤的作用。