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大片形吸虫(Fasciola gigantica)主要感染我国南方地区的反刍动物,一般会在水牛、奶牛、山羊的肝脏胆管内生存,严重危害动物的健康,给畜牧业带来巨大的损失。大片形吸虫病也是一种严重的人畜共患寄生虫病,2011年中国云南宾川曾经爆发人群大片形吸虫病,一共有20多人感染。目前对该病的诊断、治疗和免疫预防的研究工作仍然比较薄弱,尤其是仍缺乏实用有效的诊断和免疫预防方法,因此建立特异、敏感的早期诊断方法是控制本病的必要条件。本研究通过人工饲养大片形吸虫的中间宿主小土蜗螺,人工培养大片形吸虫的虫卵孵化毛蚴,用大片形吸虫的囊蚴感染小土蜗螺获得成功,在温度30 ℃,12d孵化出毛蚴,并以小鼠为试验动物进行了人工感染试验,结果表明,大片形吸虫的幼虫可在小鼠体内发育生存7-8周,并能造成比较有规律的病理变化。通过培养5株(6D3、6B4、7D2、7D1、7D4)细胞连续传代,筛选优质的分泌稳定抗体的细胞注射BALB/c小鼠,收集小鼠腹水,纯化得到纯度较高的大片形吸虫单克隆抗体。结果配对组合出了单克隆抗体7D2作为包被抗体,单克隆抗体7D1作为酶标记抗体,成功建立起了检测大片形吸虫血液循环抗原的单抗体夹心ELISA方法,可以作为早期诊断大片形吸虫病感染情况的方法。最终结果表明,该方法的最佳反应条件为:包被抗体7D2的稀释倍数为1:6400,HRP标记的7D1抗体稀释倍数为1:10 000,用5%的脱脂奶粉封闭,酶标二抗反应时间为1h,底物显色时间为25min,在仪器上读出OD450值。用此方法分别做敏感性、特异性、重复性实验。结果较好。本研究还使用三氯苯达唑、阿苯达唑、吡喹酮人工服喂治疗感染了大片形吸虫囊蚴的小鼠。结果显示:三氯苯达唑的治疗效果佳,剖检观察小鼠腹腔、肝脏内检虫率低,且肝脏、腹腔内无明显病理变化。此次研究成功培育出大片形吸虫囊蚴,可利用小鼠作为大片形吸虫幼虫感染的试验动物,这为大片形吸虫病的早期诊断预防奠定了基础。建立了早期诊断此病的单抗体夹心ELISA方法,并对临床样品进行检测。同时药物治疗感染了大片形吸虫囊蚴的小鼠也取得较理想的结果。以上研究工作为大片形吸虫的早期诊断和其他方面的深入研究奠定了理论基础。