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小熊猫(Ailurus fulgens)在圈养过程中,因免疫力低下引起的疫病,尤其传染病是导致的小熊猫发病和死亡的主要原因。防治小熊猫疫病的抗菌素等药物在多次使用后易产生耐药性,且副作用明显,严重影响疗效。我们认为,通过人工调整改善小熊猫免疫力,提高小熊猫抗病力,是降低人工饲养过程中小熊猫死亡率的最佳途径。大量临床研究资料证明,IFN-γ在机体的免疫调节,抗病毒、抗细胞内细菌感染及控制肿瘤等方面发挥重要作用,对人类和动物疫病的临床治疗取得了很好的效果。小熊猫IFN-γ的研究至今国内外未见报道,开展小熊猫IFN-γ研究,对于小熊猫的疾病防控有重要的理论和实践价值。本研究以小熊猫IFN-γ克隆基因为材料,应用分子生物学技术构建原核表达载体和表达菌株,优化重组菌的诱导表达条件,利用镍柱纯化重组IFN-γ,采用淋巴细胞增殖试验和间接ELISA测定小熊猫重组IFN-γ的免疫活性。研究获得结果1.双酶切和测序结果表明,小熊猫IFN-γ-pET-32a表达质粒和IFN-γ-pET-32a-B21表达菌株构建成功；在15℃,用终浓度0.7mmol/mL的IPTG诱导IFN-γ-pET-32a-B21表达菌32h,在菌液上清中能够得到最大量的目的蛋白；通过镍柱纯化IFN-γ原核表达产物时,300mmol/mL咪唑为最佳洗脱浓度。2.浓度组为10-1×1.56mg/mL、10-2×1.56mg/mL的小熊猫IFN-γ原核表达产物与小熊猫淋巴细胞共孵育后,具有显著刺激淋巴细胞增殖的效应(P<0.05),经热变性处理的小熊猫原核表达IFN-γ刺激T淋巴细胞增殖的活性则完全丧失。3.IFN-γ原核表达产物具有刺激小熊猫外周血淋巴细胞分泌IFN-γ活性。试验结果表明,构建的IFN-γ-pET-32a-B21表达菌,其表达产物经纯化后具有刺激小熊猫淋巴细胞增殖等免疫活性,为提高圈养小熊猫免疫力和小熊猫疫病防治提供了新的的方法。