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【背景】帕金森病(Parkinson disease,PD)是一种中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病。线粒体功能障碍在PD发病过程中发挥着重要作用,与PD发病相关的众多环境与遗传因素中,线粒体功能障碍是一个共同途径。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor 1 alpha,PGC-1α)是一个强大的转录调节因子,可与多个转录因子(ERRα、NRF-1、NRF-2)相互作用,增强其活性和/或促进其表达,进而广泛参与线粒体生物合成、氧化应激、细胞代谢和基因表达等生理过程的调控。目前PGC-1α在PD中的作用仅有部分研究,且在PD的发病机制中PGC-1α信号转导对线粒体生物活性的影响尚不明确。【目的】PGC-1a过表达对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体功能的保护作用及其信号转导机制。【方法】1.细胞模型的建立:根据前期实验摸索的最适腺病毒感染MOI值(100)和MPP+工作浓度(1000μmol/L)建立过表达细胞模型和PD细胞模型。2.Western blot和Real-time PCR方法检测各实验组PGC-1α的表达水平。3.ELISA方法测定SH-SY5Y细胞质内和线粒体内细胞色素C的含量。4.Western blot方法检测ERRα、NRF-1和NRF-2的表达水平。5.荧光共聚焦观察PGC-1α在正常情况和MPP+作用下的核内外分布情况。【结果】1.通过Western blot和Real-time PCR方法检测发现过表达组中的PGC-1α的蛋白水平和转录水平比空病毒感染组和空白对照组均有明显的升高,实现了SH-SY5Y细胞内PGC-1α的过表达。2.ELISA方法检测细胞色素C含量显示:PGC-1α过表达预处理后减少SH-SY5Y细胞线粒体内细胞色素C向细胞质的释放。3.Western blot结果显示:ERRα、NRF-1的蛋白水平趋势与PGC-1α蛋白较一致,NRF-2的蛋白水平在MPP+作用下和过表达组中无明显的变化。4.荧光共聚焦结果显示:在正常情况下,PGC-1α几乎在SH-SY5Y细胞核内分布;而在逐步增大MPP+浓度作用下细胞质中逐渐出现微量的PGC-1α的分布。【结论】1.本实验运用MPP+对SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病细胞模型,是传统的帕金森病体外细胞模型;腺病毒对SH-SY5Y细胞具有较高的感染率,Ad-GFP-PGC-1α腺病毒在SH-SY5Y细胞实现了PGC-1α的高表达,为进一步研究PGC-1α在PD细胞模型中的作用提供了实验依据。2.PGC-1α过表达可稳定线粒体膜,减少细胞色素C的释放从而抵抗MPP+诱导氧化应激引起的线粒体损伤。3.PGC-1α表达增加,能使ERRα和NRF-1核转录因子表达增加,推测PGC-1α可能主要通过ERRα和NRF-1通路减少MPP+引起的氧化应激损伤。