3-氨基丁醇检测和生物拆分方法的初步研究

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度鲁特韦是由GSK公司开发的一款重磅新型抗艾滋药物,具有耐药屏障高,药物相互作用少、疗效优等特点,未来市场前景广阔。R-3-氨基丁醇,是一种手性氨基醇类化合物,在有机合成以及药物生产中都有着广泛的用途,是合成度鲁特韦的手性源。本研究围绕3-氨基丁醇的检测以及生物拆分法制备R-3-氨基丁醇做了一系列工作。为解决现有3-氨基丁醇检测方法的局限,开发出一套新的利用荷移反应和液相色谱快速方便检测3-氨基丁醇的方法。介绍了荷移络合物的概念、应用及特点,说明了高效液相检测无紫外吸收3-氨基丁醇的可能性。通过对荷移反应的缓冲液pH、荷移试剂用量、反应温度和时间等因素的考察,以及对液相色谱的流动相比例、流速、柱温以及梯度时间等条件的优化,最终发现在pH8.4缓冲溶液条件下,1 mL氨基丁醇(1 g·L-1)与5mL四氯苯醌(0.002 mol·L-1)于60℃水浴锅中水浴60 min能使两者荷移络合完全,确定的液相检测条件为:0.001%三乙胺水溶液-甲醇梯度洗脱,柱温为25℃,流速为1.0 mL·min-1,进样体积为10μL。检测方法对氨基丁醇的线性范围为0.1-0.6 g·L-1,R2=0.9994,方法加样回收率为98.3%-103.6%,RSD%为0.205-0.344。本研究建立的荷移反应-高效液相色谱法分辨率和灵敏度高,分析结果重复性高,操作简单,不易受杂质等其他因素影响,检测范围广泛,可用于其他无紫外吸收的脂肪族氨基醇类的含量测定,为氨基丁醇的检测和研究以及其他氨基醇类化合物的检测提供了有力的分析手段。建立了氨基丁醇降解菌的筛选模型,以混旋氨基丁醇为唯一碳源或唯一氮源用土壤筛到了能够降解3-氨基丁醇的四株菌,经鉴定分别为链霉菌属(C1)、类芽孢杆菌属(C2)、洋葱伯克霍尔德菌复合体(C3)和肠杆菌属(N1)。利用荷移-高效液相色谱法和气相色谱-衍生化法对四株菌降解氨基丁醇的能力以及光学构型进行了分析,发现C1菌种消耗的R-氨基丁醇与S-氨基丁醇相差无几,N1菌种所消耗的S型比R型多4%,而C2和C3所消耗的S型比R型多8%左右。未来将对四株菌进行进一步分析,分析其降解3-氨基丁醇的机理和具体的酶,并对酶进行外源表达和定向改造,结合培养条件的优化,专一高效的降解S-3-氨基丁醇,从而实现生物拆分法制备R-3-氨基丁醇的目的,以替代现有的高成本的化学拆分法。
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