论文部分内容阅读
气单胞菌(Aeromonas spp.)是水产养殖环境中常见的条件致病菌,能够引起细菌性疾病的爆发,给水产养殖业带来严重的经济损失。苯扎溴铵消毒剂有着抗菌谱广、有效浓度低、副作用小等优点,可以用于气单胞菌病的防治,它也是“农业部1435号公告”中,获得批准在水产生产中使用消毒剂之一。本研究对复合养殖模式下不同来源的气单胞菌进行了苯扎溴铵药物敏感性测试和消毒剂耐药基因检测,以期了解不同来源气单胞菌对苯扎溴铵的敏感性和消毒剂耐药基因携带情况,为苯扎溴铵在水产养殖中科学、有效的应用提供参考。以标准菌株大肠杆菌(Escherichia coli ATCC 25922)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila ATCC 7966)为受试菌株,按照美国临床与实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的微量肉汤稀释法的操作方法,测定不同菌液浓度和不同M-H(水解酪蛋白)肉汤浓度下的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)及最小杀菌浓度(Minimal Bactericidal Concentration,MBC)。结果显示:细菌接种浓度在0.5×103CFU/m L~0.5×108CFU/m L之间变化时,受试菌株的MIC值随细菌浓度变化的差异不明显。当MH肉汤浓度在10%~100%之间变化时,MIC值随肉汤浓度变化的差异性亦不明显。因此本研究采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法(96孔板法)(介质为M-H肉汤,而每孔中的菌液终浓度为0.5×106CFU/m L)作为进一步开展药物敏感性实验的方法。2013年06月从广东省佛山市某一猪-鱼复合养殖鱼塘采集样品,共筛选分离到121株气单胞菌,分别来源猪粪(64株),池塘水(20株)、池塘底泥(14株)及鱼体组织(23株)。采用微量肉汤稀释法(96孔板法),对分离的121株菌株进行MIC和MBC测定。结果显示,苯扎溴铵对大肠埃希氏菌(ATCC 25922)的MIC值为8mg/L,对嗜水气单胞菌(ATCC 7966)的MIC值为16mg/L,对猪源受试菌株的MIC值范围在8~128mg/L,对养殖池塘来源菌株的MIC范围均在8~64mg/L。苯扎溴铵对猪源受试菌株的MIC50和MIC90值最低,分别为8.9mg/L和30.0mg/L;而鱼源受试菌株的MIC50和MIC90值最高,分别为22.3mg/L和39.2mg/L。99.1%的受试菌株MBC/MIC比值≤4。MBC/MIC是表征消毒剂药效的重要指标,表明苯扎溴铵对气单胞菌仍具有良好的杀菌效果。但苯扎溴铵对受试菌株的MICs显著大于“农业部1435号公告”中的推荐使用浓度0.1~0.15mg/L。根据现有的文献报道,我们选择了季铵盐类(Quaternary ammonium compound,qac)耐药相关基因中6种常见的qac基因,通过PCR的方法,检测分析了121株气单胞菌的季铵盐耐药相关基因。结果显示:119株(98.4%)携带了qac基因,其中52株(43.0%)携带2种qac基因;23株(19.0%)携带3种qac基因;25株(20.7%)携带4种qac基因;1株(0.8%)携带5种qac基因;qac A/B阳性菌株的MIC50、MIC90分别为30.6mg/L、52.9mg/L,qac H阳性菌株的MIC50、MIC90分别为32.0mg/L、64.0mg/L,相较于其它qac基因阳性菌株的MIC50和MIC90高。qac A/B和qac H基因可能与气单胞菌对苯扎溴铵的抗性产生有关。qac基因的高检出率和多重携带现象,提示复合养殖模式下气单胞菌可能存在对苯扎溴铵耐药的风险。