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本论文包括三部分内容:一、裙带菜(Undaria pinnatifida,wakame)多糖成分的研究;二、裙带菜中甘露糖醛酸研究;三、裙带菜多糖活性筛选研究。
第一部分内容包括:对裙带菜多糖成分的研究主要采用沸水提取,95%乙醇沉淀,透析除去小分子化合物,最后冷冻干燥得到裙带菜粗多糖(UPPS)。裙带菜粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析分成五个具有不同电荷性质的多糖部位,用HPGPC法测定其分子量分布后选用合适的分子筛凝胶柱层析,最后分离得到三个均一多糖UPPS03、UPPS04和UPPS08,均为首次从该藻类中分离得到;综合利用各种化学方法(糖组成分析、高碘酸氧化及Smith降解、糖醛酸还原、甲基化分析等)和谱学方法(13C NMR、IR等)对UPPS03和UPPS04进行了详细的结构鉴定,对UPPS08进行了部分结构鉴定。研究结果表明:UPPS03和UPPS04均为β型1,4连接的聚甘露糖醛酸,平均分子量分别为3.6×104和1.1×104。UPPS08为一含硫酸基酸性杂多糖,分子量为6.2×104,硫酸基含量为28.3%,糖醛酸含量为25.7%,其单糖组成及摩尔比为岩藻糖:木糖:甘露糖:半乳糖:甘露糖醛酸:葡萄糖醛酸=15.4:3.6:1.4:1:4.0:6.2。主要有1,4-连接的葡萄糖醛酸,1,2,4-连接甘露糖,1,2-连接岩藻糖,1,4-连接半乳糖及端基甘露糖几种连接方式,还有少量端基葡萄糖和1,4-连接木糖组成。
第二部分内容包括:为了分离得到甘露糖醛酸对照品,对0.3 M NaCl洗脱部位多糖(UPPS-I)进行完全酸水解,水解产物经ODS柱分离纯化,得到甘露糖醛酸,并综合利用GC-MS、ESI-MS、IR、13C NMR等方法对该单糖进行了初步结构鉴定。
第三部分内容包括:对裙带菜均一多糖UPPS03、UPPS04和UPPS08,进行了内皮细胞HMEC-1增殖活性、抗肿瘤细胞活性、抗血管生成活性以及免疫刺激活性的筛选研究。在所测定浓度范围内,UPPS03和UPPS04对ConA诱导的T细胞增殖和LPS诱导的B细胞增殖反应均具有一定促进作用,且具有一定浓度依赖关系;UPPS03和UPPS04在100 ug/mL对内皮细胞HMEC-1的生长具有一定抑制作用;UPPS03和UPPS04在1 mg/mL浓度时对Bel7402肝癌细胞生长无明显抑制作用,对内皮细胞HMEC-1新生血管生成也无明显抑制作用;UPPS03、UPPS04和UPPS08在0.01 mg/mL浓度时,对核转录因子NF-kB无明显的免疫激活作用。