新铁炮百合（Lilium formolongi）是台湾百合（L.formosanum）和麝香百合（L.Longiflorum）种间杂种，是以种子繁殖生产切花为特色。其株系间亲和性较大，又可保留种球，适合研究世代的遗传分化。本实验通过对自交株系的RAPD检测，探讨了其遗传多样性变异趋势和株系间的遗传分化。主要研究结果如下： （1）通过优化设计，确定了新铁炮百合的RAPD反应体系和反应程序参数。 单引物反应：dNTPs 150μmol／L，Bg²⁺1.5mmol／L，Taq聚合酶1U，引物primer 0.3μmol／L，模板DNA50ng，反应总体积为20μl。 双引物反应：dNTPs 200μmol／L，Mg²⁺2mmol／L，Taq聚合酶1.5U，引物primer 0.4μmol／L，模板DNA50ng，反应总体积为20μl。双引物的最佳反应成分浓度普遍比单引物的要高。 反应程序参数：（1）94℃预变性5min 1个循环；（2）94℃变性30sec，37℃退火50sec，72℃延伸1min，35个循环；（3）72℃延伸10min 1个循环；（4）4℃保存，待用。 （2）采用正交设计的极差法得出影响RAPD实验因素的大小顺序：①反应条件因素显著性程度依次为：Mg²⁺＞primer＞Taq＞dNTPs＞DNA；②反应参数因素显著性程度依次为：循环次数＞延伸时间＞复性温度＞复性时间。 门门 条单引物和 8个双引物用于新铁炮百合的 RAPD扩增，产生扩增总谱带达 198条，163条谱带是多态的，多态百分比达 引．8兄 双引物谱带的产生和单引物的谱带无必然关系。双引物可以扩增出单引物所没有的DNA片段，但也可能会连单引物的谱带也扩增不出来。 （4）用多态性百分率、相对多态性频度和 Shannon 遗传多样性指数评价世代间的遗传多样性变化。其中引物 SIg、5303＋S 366＼519＋5210、5469＋519、555＋530白 多态百分比 均为 100儿 羡现极高的多态性。F。世代、F。世代、F。世代多态性百分比分别为 5 9．1趴 5 6．6兄 4 8．0队 多态性百分比呈现出下＊ 白 趋势。 三个世代的 遗传多样性主 数分别为：1．749、1．530、1．292，也是呈现下降的趋势。在总变异中，群体内和群体间遗传多样性所占的比率分别为 76．2％和 23．8儿羡现出群体内大于群体间的趋势，这与新铁炮百合的繁育系统相符合的。 门)通过非加权算术平均数对群聚类法 uPGMA)构建品系间的系统聚类树。从三个数据集获得的聚类结果可以看出，其聚类树状图基本反应系谱关系：双引物扩增结果能较精确反应其系谱关系。在亲缘关系相近的品系，用RAPD方法能比较准确地推测到世代间的遗传多样性、遗传分化的细小变化。