提取经雄性动物细胞免疫后的雌性动物抗血清,得到的抗体纯度不高、效价太低,无法用于H-Y抗原的进一步研究。本研究以SMCY重组蛋白代替雄性动物细胞作为免疫材料,免疫隐性白母鸡,收集鸡蛋,PEG 6000方法提取蛋黄中的IgY抗体。为了进一步得到高纯度的特异性抗H-Y抗原抗体,我们将Ni-NTA柱纯化N端带有6his-tag标签的SMCY重组蛋白作为配基,偶联至CNBr活化的Sepharose 4B制成亲和层析柱,分离纯化抗H-Y抗原的特异性抗体IgY。结果表明,经Ni-NTA柱纯化后,SMCY重组蛋白纯度从28%达到80%以上,制作成的亲和层析柱纯化可以得到纯度高达97%的抗H-Y抗原的特异性抗体IgY。经雌、雄小鼠肝脏细胞的免疫组化检测,荧光显微镜下能够观察到雄性小鼠肝脏细胞有强烈荧光,而在雌小鼠肝脏细胞表面观察不到特异荧光。研究结果表明,SMCY重组蛋白具有H-Y抗原的免疫原性,能够代替雄性动物细胞作为免疫材料;Ni-NTA柱纯化后的SMCY重组蛋白,可作为亲和配基制作亲和层析柱,用于纯化分离抗H-Y抗原的特异性抗体;IgY技术生产的卵黄抗体中有较高含量的抗H-Y抗原的特异性抗体;亲和层析纯化以后,得到的IgY抗体能够特异识别结合与雄性小鼠肝脏细胞表面,对H-Y抗原具有很好的特异性。