骨纤维异常增殖症（fibrous dysplasia,FD）是一种非遗传性、良性骨骼疾病。颅颌面骨与四肢骨是最好发部位，其中颌面骨FD临床表现为面部膨隆畸形、疼痛、牙合功能紊乱和病理性骨折等症状。目前临床治疗主要有外科手术修整与破骨细胞抑制类药物两种方式，其均为对症处理，且远期疗效尚无可靠数据报道。因此，有必要从发病机制角度来研究新的更有效的靶向治疗药物。最近研究表明FD是一种骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）疾病，由于BMSCs的鸟苷酸结合蛋白α活性刺激肽（guanine nucleotide-bindingprotein alpha-stimulating activity polypeptide,GNAS）发生基因突变，导致环磷腺苷-环磷腺苷效应元件结合蛋白（cyclic Adenosine Monophosphate-cAMP-response element binding protein,cAMP-CREB）通路的激活，从而引起FD成骨障碍及细胞高增殖活性的病理表现，但cAMP-CREB通路对FD BMSCs的具体调控机制仍不明确。本课题组前期研究表明组蛋白去乙酰化酶8（HDAC8）可通过表观遗传学修饰抑制BMSCs成骨分化能力，并且我们发现在FD BMSCs中HDAC8呈高表达状态，此外，通过生物信息学软件预测到转录因子CREB1与HDAC8启动子之间存在可能的结合位点。因此，本实验通过检测HDAC8对FD BMSCs生物学行为的影响，并初步研究了cAMP-CREB1-HDAC8通路及其调控的分子机制，为临床治疗FD提供新的思路。　　第一部分：颌骨骨纤维异常增殖症来源BMSCs生物学特征　　目的：比较正常BMSCs及FD患者BMSCs（FD BMSCs）增殖、凋亡、成骨分化及cAMP、CREB1、p-CREB1、HDAC8等分子表达的差异。　　方法：1）利用组织块法体外培养颌骨骨纤维异常增殖症来源FD BMSCs，每三天换一次液，以除去未贴壁细胞的及漂浮的组织块，镜下观察到细胞集落形成并相互融合时进行首次传代；2）经影像学评估、细胞基因组DNA测序及H&E染色来确定FD BMSCs来自FD病灶；3）BrdU实验分析其增殖能力；4）流式细胞仪分析其凋亡能力；5）ELISA实验检测细胞内cAMP水平；6）实时定量PCR及Western blot等方法检测FDBMSCs中相关分子的表达；7）通过矿化诱导FDBMSCs并进行实时定量PCR、Western blot及茜素红染色检测FD BMSCs的成骨分化能力。　　结果：（1）三例FD患者的影像学均变现为病灶区骨质膨隆，密度不均，呈典型磨玻璃样改变；基因测序结果显示GNAS基因均存在R201H或R201C位点突变；H&E染色呈现成熟的板状骨被大量纤维组织以及不成熟的、纤薄、英文字母样骨小梁所取代。（2）FD BMSCs较正常BMSCs形态学无明显差异，但增殖活性升高，凋亡能力下降，矿化诱导7天后，成骨分化相关分子表达明显下调且钙结节形成能力减弱。FD BMSCs中cAMP、p-CREB1、HDAC8表达显著增高，TP53表达下降。　　结论：本实验通过组织块贴壁培养法获得BMSCs及FD BMSCs，通过比较其生物学行为及关键分子的表达差异，初步表明HDAC8参与调控了FD BMSCs的成骨分化障碍以及增殖能力增强，且增殖能力的增强可能与TP53的表达下调相关。　　第二部分：cAMP-CREB1-HDAC8通路调控颌骨骨纤维异常增殖症BMSCs增殖与成骨分化　　目的：应用cAMP抑制剂、激动剂及HDAC8敲减等手段干预cAMP-CREB1-HDAC8通路，分析其对FD BMSCs增殖活性、成骨分化的影响，并探讨该通路调控FD发病的相关机制。　　方法：1）外源性cAMP处理正常BMSCs，cAMP抑制剂处理FD BMSCs，HDAC8抑制剂处理FD BMSCs，HDAC8敲减慢病毒载体转染FD BMSCs，通过实时定量PCR及Western blot检测通路相关分子的表达；2）BrdU实验分析其增殖能力变化；3）流式细胞仪分析其凋亡能力变化；4）实时定量PCR、Western blot及茜素红染色方法检测不同处理组细胞的体外成骨分化能力；5）小干扰RNA敲减CREB1，通过实时定量PCR及Western blot方法检测CREB1、p-CREB1、HDAC8、TP53的表达变化；6）ChIP实验分析CREB1与HDAC8启动子区DNA序列的结合位点；7）双荧光素酶报告基因实验验证CREB1与HDAC8分子间可能存在的结合和调控关系。　　结果：（1）正常BMSCs在cAMP处理后p-CREB1、HDAC8表达增高，TP53表达降低，细胞增殖能力增强，细胞凋亡能力减弱，成骨相关分子表达降低，矿化诱导成骨能力下降。（2）与上述结果相反，FD BMSCs在加入cAMP抑制剂后p-CREB1、HDAC8表达下降，TP53表达增高，细胞增殖能力减弱，细胞凋亡能力增强，成骨相关分子表达增高，矿化诱导成骨能力增强。（3）HDAC8抑制剂处理FD BMSCs后TP53表达增高，细胞增殖能力减弱，细胞凋亡能力增强，成骨相关分子表达增高，矿化诱导成骨能力增强。（4）与结果（3）一致，HDAC8敲减慢病毒载体转染FD BMSCs后TP53表达增高，细胞增殖能力减弱，细胞凋亡能力增强，成骨相关分子表达增高，矿化诱导成骨能力增强。（5）小干扰RNA敲减CREB1后CREB1、p-CREB1、HDAC8表达下降，TP53表达增高。（6）ChIP实验结果显示CREB1与HDAC8启动子区四个结合位点发生结合。（7）双荧光素酶报告基因实验证实四个阳性结合位点中CREB1与HDAC8启动子区第1、3号结合位点发生结合并参与调控基因表达。　　结论：HDAC8是FD BMSCs异常生物学行为的关键性调控因子，且HDAC8受到了cAMP-CREB1的转录激活调控，本实验证实了cAMP-CREB1-HDAC8的存在且对FD的发病起到关键调控作用。　　第三部分：HDAC8抑制对颌骨骨纤维异常增殖症BMSCs裸鼠异位骨形成的影响　　目的：观察HDAC8抑制剂及HDAC8敲减等干预手段对FD BMSCs异位成骨的影响，并探索干预HDAC8对FD可能的治疗作用。　　方法：1）构建HA/TCP/BMSCs复合载体，分为BMSCs组、FD BMSCs组、LeV-scramble组、LeV-shHDAC8组及PCI-34051（HDAC8抑制剂）组，将载体移植至裸鼠背部皮下；2）移植八周后，处死裸鼠，取材、固定、包埋、切片，以备组织学染色，H&E和Masson三色染色分析不同组细胞异位形成的骨基质，免疫组织化学染色分析不同组载体中成骨细胞的活性。　　结果：与阴性对照组比，HDAC8敲减组和HDAC8抑制剂组载体中FD BMSCs形成了更多的骨基质且成骨细胞活性明显强于阴性对照组。而阴性对照组中仅见大量纤维组织，极少骨基质形成和成骨细胞活性。　　结论：HDAC8抑制能促进FD BMSCs裸鼠体内异位成骨，HDAC8干预可成为临床治疗FD疾病的潜在手段。