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目的 近年来星形胶质细胞在中枢神经系统中的作用正日益受到重视，而且星形胶质细胞与癫痫的发生与发展有着密切的关系。本课题旨在通过研究丙戊酸钠(Sodium valproate,VPA)慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞氨基酸递质的释放以及与之密切相关的多种代谢酶及转运体mRNA表达的影响，探讨星形胶质细胞在VPA抗癫痫机制以及停药反跳机制中所起的作用。以期为更好地预防和控制VPA停药反跳以及新型抗癫痫药物的研究与开发提供实验依据。 方法 本实验用来源于大鼠星形胶质细胞的C6神经胶质瘤细胞建立VPA慢性作用的星形胶质细胞模型。从氨基酸递质释放、mRNA表达和蛋白表达三个水平以及停药后0.5小时、6小时、12小时、24小时和48小时五个时间点来检测VPA慢性作用后快速停药对C6细胞的影响。本实验采用高效液相色谱(High performance liquid chromatography，HPLC)检测C6细胞天门冬氨酸(Aspartate，Asp)、谷氨酸(Glutamate，Glu)、天门冬酰胺(Asparatmine，Asn)、谷氨酰胺(Glutamine，Gln)、甘氨酸(Glycine，Gly)和γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid，GABA)的释放量；采用RT-PCR方法检测与这些氨基酸代谢相关的酶及其转运体mRNA表达水平的变化；用Western blot方法检测谷氨酸脱氢酶67(Glutamate decarboxylase 67KDa，GAD67)和谷氨酸脱氢酶65(Glutamate decarboxylase 65Kda，GAD65)蛋白表达水平的变化。 结果 1 VPA慢性作用可促进C6细胞Glu、Asp和GABA的释放，抑制Gln的释放，而对Asn和Gly的释放无明显影响。停药后Glu、Asp和GABA的释放呈反跳样变化。 2 RT-PCR检测结果显示，VPA慢性作用使谷氨酸脱氢酶 (Glutamate dehydrogenase，GDH)、GAD67、谷草转氨酶1(Glutamate oxaloacetate transaminase 1，GOT1)、谷草转氨酶2(Glutamate oxaloacetate transaminase 2，GOT2)、γ-氨基丁酸转氨酶(γ-Aminobutyric acid transaminase，GABA-T)、中性氨基酸转运体(Neutral amino acid transporter，NAAT)、谷氨酸转运体1(Glutamate transporter-1，GLT-1)和兴奋性氨基酸载体1丙戊酸钠停药反跳在细胞水平上的分子机制研究(Exeitato汀amino aeid earrierl，E^^CI)mRNA表达上调，但使卜氨基T酸转运体3(丫一Aminobutyric aeid transPorter一3，GAT一3)mRNA表达下调.停药后GDH、GAD67、GOTI、GOTZ、GABA·T、NAAT、GLT一l、EAACI和GAT一3mRNA表达呈反跳样变化. 3在C6细胞没有检测到GAD65和谷氨酸/天门冬氨酸转运体(G一utamatezaspartate transporter，GLAsT)m洲^的表达.我们在C6细胞检测到有GLT一1 mRNA表达，这与目前报道的对于Glu转运体，C6只表达EAACI而不表达GLT一1和GLAST的结果不同。对此尚需进一步证实. 4在vPA慢性作用下C6细胞丙酮酸狡化酶(Pyruvatecarboxylase，pC)和谷氨酸胺合成酶(Glutamine synthetase，GS)mRNA的表达明显下调.停药后GS mRNA表达逐渐上调但仍明显低于对照组水平，可能与VPA的残留作用有关.而PCmRNA表达变化与GS的略有不同，表现在停药后PC mRNA表达先上调然后又下调到低于对照组的水平，这可能亦与VPA的残留作用有关.停药后GOTZ、GAT一3和GABA一mRNA表达的变化同样也表现出VPA残留作用的影响.VPA慢性作用后使谷氨酞胺酶 (Glutaminase，Glnase)mRNA表达上调;停药后Glnase mRNA表达开始下调。vPA的慢性作用可抑制SNI谷氨酞胺转运体(System NI glutaminetransporter，sN一oln一T)m州A的表达，停药后sNI oln·T mRNA的表达水平逐渐升高。 5 Western blot检测结果显示，VPA慢性作用使C6细胞GAD67蛋白表达上调。停药后48h内GAD67蛋白表达仍处于较高水平，表现出明显的VPA残留作用.同样，在C6细胞也没有检测到GAD65蛋白的表达。 结论vPA慢性作用可促进C6细胞Glu、AsP和GABA的释放，抑制Gln的释放。vPA慢性作用后停药可引起C6细胞Glu、AsP和GABA的释放呈反跳样变化，与之相关的一些代谢酶及转运体mRNA表达水平也出现相应的反跳样变化，提示这种变化与VPA停药反跳的发生有关。由此推测星形胶质细胞在VPA抗癫痛机制中具有重要作用，与VPA停药反跳的发生密切相关。详细机制尚需进一步研究.