原癌基因c-myc是myc家族的重要成员之一,是髓细胞性白血病病毒的癌基因v-myc的细胞同类物,定位于染色体8q24.12-8q24.13,其编码产物c-myc蛋白的分子量为62kDa。c-myc基因的功能甚多,它既是一种可易位基因,又是一种受多种物质调节、可使细胞无限增殖、获永生化功能、促进细胞分裂的可调节基因,在很多肿瘤中都高表达。在正常细胞中的c-myc原癌基因一旦被激活,转为癌基因,活化转录和翻译,c-myc mRNA和c-myc蛋白的表达便异常增高,使细胞脱离正常生长的调节限制而具有高度增生潜能,向恶性表型转化,抑制细胞分化,促进细胞恶变,最后导致肿瘤的发生。鉴于c-myc的过表达与肿瘤发生呈高度正相关,c-myc抗血清可以应用于肿瘤的诊断,本研究通过制备c-myc单克隆抗体,为肿瘤诊断试剂盒的研发提供基础实验数据。用原核表达及纯化的c-myc蛋白抗原免疫3只健康雌性BALB/c小鼠,3次免疫后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以10:1比例进行细胞融合,再经HAT选择培养基筛选、间接ELISA方法检测、有限稀释法克隆,最终获得2株能够稳定分泌抗c-myc特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并分别命名为SHH-1H11和SHH-2A9。抗体亚型鉴定表明,SHH-1H11、SHH-2A9分别为IgG1亚类和IgM。经BCA Protein Assay Reagent Kit检测显示,杂交瘤细胞SHH-1H11上清和腹水的抗体浓度分别为0.47mg/ml和2.51mg/ml,SHH-2A9的上清和腹水的抗体浓度分别是0.49mg/ml和2.45mg/ml。ELISA检测结果显示,这两株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5120;小鼠腹水效价分别为1:64000、1:32000,c-myc单克隆抗体只与c-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,这表明获得的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性。本研究为肿瘤诊断试剂盒的研发提供了良好的技术基础。