拟南芥F-box基因At5g22700功能的初步分析

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生物信息学分析表明,At5g22700编码的蛋白含有保守的F-box,FBD结构域,属于F-box蛋白家族。应用plantCARE软件对其起始密码子上游启动子进行分析,发现其启动子区域存在大量光和生长素响应元件。目前该基因的功能还未知。本文对At5g22700功能进行初步研究,取得了以下主要研究结果:  首先克隆获得At5g22700全长和仅含F-box结构域的CDS序列,采用酵母双杂交和x-gal显色实验分析At5g22700蛋白与16个ASK家族蛋白的相互作用,发现该蛋白的F-box结构域可与ASK家族成员中的ASK4相互作用,说明At5g22700可能以SCF复合体的形式行使功能。  再通过Gateway克隆技术、农杆菌介导的花序浸染法,获得了2个过量表达转基因拟南芥株系At5g22700ox-1、At5g22700ox-2。同时从拟南芥TAIR网购买到T-DNA插入突变体,通过鉴定得到纯合突变体Salk_060937和Salk_009942。At5g22700组织特异性分析结果显示,该基因在各组织中均有表达,其中根和花中的表达量相对较高,茎中的表达量较低,说明该基因可能在根和花的生长发育过程中起作用。  进一步分析At5g22700基因在光信号通路中的功能,发现At5g22700基因的转录表达受蓝光抑制,红光促进,远红光无关。观察不同光下根长变化,发现仅在蓝光下,过表达植株的主根明显长于野生型。再分析不同蓝光光强下主根的变化,发现光强越强,过表达植株的主根比野生型的差异越大,表明该基因可能存在对蓝光特异性反应的现象。而缺失突变体在任何光下都与野生型没有差别,表明可能存在功能冗余的现象。  最后分析At5g22700在生长素信号通路中的功能,发现随生长素浓度的升高,抑制了主根的生长,过表达植株比野生型更敏感,光强越弱,抑制作用越明显。用生长素极性运输NPA处理,过表达植株比野生型更敏感,受抑制程度明显大于野生型。鉴定植株内PIN1和PIN2的表达量发现,过表达植株内表达量明显降低,缺失突变体则比野生型的表达要高。同时分析生长素合成相关的YUC家族基因,发现YUC家族基因表达量在过表达植株中降低,在缺失突变体中没有明显变化,表明At5g22700可能是生长素信号途径中的正调控因子,增强了生长素信号,负反馈来抑制生长素的极性运输和合成。
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