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目的本课题检测Wnt-5a在结直肠癌(CRC)中基因和蛋白水平的表达,同时研究Wnt-5a、β-catenin和APC蛋白表达与其临床病理因素间的关系,并分析Wnt-5a与β-catenin、APC表达的相关性,尝试从新的角度对结直肠癌的发生发展进行初步探讨,研究Wnt-5a对早期诊断和预后判断结直肠癌的价值,为今后结直肠癌的基因治疗提供理论依据。方法收集手术切除的11例新鲜结直肠癌(注意避开坏死区域取材)及相应的正常粘膜组织(距癌变边界10cm外),采用实时定量RT-PCR技术检测Wnt-5a mRNA的表达;同时选取65例结直肠癌及相应癌旁组织、20例腺瘤组织和20例正常结直肠组织的石蜡标本,采用免疫组化SP法检测Wnt-5a、β-catenin和APC基因蛋白产物的表达。运用配对t检验、卡方检验及Spearman等级相关进行统计学分析。结果实时定量RT-PCR结果Wnt-5a mRNA在72.7%(8/11例)结直肠癌组织的表达高于相应正常组织,其在结直肠癌及相应正常组织中表达的相对含量分别为:0.012317±0.013965和0.000497±0.000739,两组比较差异具有统计学意义(t=2.768,P=0.02)。免疫组化染色结果(1)Wnt-5a在结直肠正常组呈弱阳性或阴性胞质内表达,在腺瘤组呈弥漫颗粒状的中等强度阳性表达,阳性表达率为80%(16/20例),在癌旁组呈弱阳性或阴性表达,阳性表达率为40.0%(26/65例),三组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);Wnt-5a蛋白在高中分化CRC中呈中等强度或强阳性表达,阳性表达率为58.8%(20/34例),而在低分化CRC则呈明显下调的弱阳性或缺失表达,阳性表达率为12.9%(4/31例),两组比较具有统计学差异(P<0.01)。Wnt-5a的表达与肿瘤组织学分类有关(P<0.01),与其它临床病理指标比较无统计学差异(P>0.05)。(2)β-catenin在结直肠正常组中100%呈现细胞膜的线性表达;在腺瘤组、癌旁组和癌组中出现胞质和/或胞核的异常表达,其阳性表达率分别为30.0%(6/20例)、16.9%(8/65例)、81.5%(50/65例),四组比较,具有统计学差异(P<0.01);β-catenin在低分化CRC组的异常表达率(100%(31/31例))明显高于高、中分化CRC组(64.7%(22/34例));统计分析显示,β-catenin的异常表达与肿瘤TNM分期、浸润深度和有无淋巴结转移有关(P<0.05),与CRC组织学分类无关(P>0.05)。(3)APC在结直肠正常组100%呈现胞质内棕黄色表达,而在腺瘤、癌旁和癌组则出现胞质的缺失表达,其缺失率分别为10.0%(2/20例)、10.8%(6/65例)、60.0%(39/65例),APC在癌组中的缺失表达与其它三组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01),在腺瘤和癌旁组的缺失表达均无统计学意义(P>0.05)。APC的表达与肿瘤组织学分类有关(P<0.05),与肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度以及淋巴结转移情况无关(P>0.05)。(4)在结直肠癌组织中,Wnt-5a与β-catenin的异常表达呈负相关关系(r=-0.350 P=0.005);在结直肠腺瘤中Wnt-5a与β-catenin的异常表达无相关性(r=0.354,P=0.126)。(5)在结直肠癌组织中,Wnt-5a与APC的缺失表达无相关性(r=-0.164 P=0.203);在结直肠腺瘤中, Wnt-5a与APC的缺失表达呈正相关关系(r=0.541 P=0.014)。(6)在结直肠癌组织中,APC与β-catenin的异常表达呈负相关关系(r=-0.275 P=0.031);在结直肠腺瘤中,APC与β-catenin的异常表达有负相关趋势,但无统计学意义(P>0.05)。结论(1)Wnt-5a mRNA在结直肠癌组织中出现较一致的上调表达,而Wnt-5a蛋白在高分化癌中明显的高表达,在低分化癌中低表达的现象,可以推测肿瘤对Wnt-5a的调节出现在翻译水平,且Wnt-5a在CRC中可能发挥肿瘤抑制基因样作用。其在高分化癌中高表达,低分化癌中的低表达是CRC发生及演进过程中的频发事件,提示Wnt-5a可能是一种结直肠癌预后好的标志物。(2)β-catenin在结直肠腺瘤和CRC中显示有意义的胞质和/或胞核异常表达,可能参与了结直肠肿瘤发生发展过程,且极有可能发生在早期。β-catenin蛋白胞质和/或胞核的异常表达与CRC的分化程度、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期等恶性行为有关。(3)APC的缺失表达是结直肠肿瘤发生发展过程中的可见改变,其异常表达可能参与了结直肠肿瘤的发生发展过程并与肿瘤的组织学分类有关。(4)在CRC中,Wnt-5a与β-catenin的异常表达呈负相关关系,提示Wnt-5a基因的异常可能是癌基因?-catenin异常表达的原因之一。(5)在CRC中,Wnt-5a的表达与APC的表达无相关性,推测Wnt-5a或许不与APC发生联系。(6)在CRC中,β-catenin的异常表达与APC呈负相关关系,提示β-catenin的异常表达可能是因为APC蛋白的失活。