论文部分内容阅读
【研究背景】： 肺癌不仅是世界范围最高发病率的肿瘤，而且是目前死亡率最高的恶性肿瘤。多数肺癌病人确诊时已为中晚期，虽有手术及放、化疗、靶向等手段，但生存率仍未得到根本改善，肺癌5年存活率仍低于15％。人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2，HER2)基因是重要的癌基因之一，现研究显示其高表达与肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成有关。 HER2作为一种重要的致癌因子，已在乳腺癌等肿瘤中被证实对患者的个体化治疗和预后具有重要意义，但其在非小细胞肺癌中的作用目前为止仍不明确。而HER2扩增作为EGFR-TKIs获得性耐药新机制对EGFR-TKIs耐药患者有重要意义。但HER2在EGFR突变和无突变的中晚期肺腺癌中表达情况如何，是否有差异，是否与EGFR-TKIs耐药及生存有关等有待进一步研究。因此，我们通过本研究从临床标本及细胞学两方面探索HER-2在EGFR突变的中晚期肺腺癌中的表达及意义。 【研究目的】： 本研究以中晚期肺腺癌组织标本及肺腺癌细胞株为主要研究对象，研究HER2在 EGFR突变和无突变的中晚期肺腺癌中表达情况，差异情况，与EGFR-TKIs耐药及生存关系等。探索HER-2与中晚期肺腺癌EGFR突变患者预后和EGFR-TKI靶向耐药的关系。 【研究方法】： 1.应用免疫组化方法分别检测各EGFR突变与无突变中晚期肺腺癌标本中HER2的表达情况并进行统计学分析。 2.应用GraphPAD Prism5软件分析EGFR突变中晚期肺腺癌病例中HER-2表达和EGFR-TKI耐药时间关系及和生存的关系。 3.通过RT-PCR检测HER2 mRNA在肺腺癌细胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的表达情况。 4.通过Western Blot研究肺腺癌细胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表达情况。 5.通过生长抑制实验研究赫赛汀对A549、H1299、PC9、H1975细胞株生长抑制作用。 6.统计学方法：采用SPSS19.0以及GraphPad Prism5软件进行统计分析，实验数据以均数±标准差表示，定量资料组间比较采用 t检验分析，定性资料组间二分类比较采用χ2检验。检验水准P=0.05。P＜0.05为差异有统计学意义。 【研究结果】： 1.中晚期肺腺癌HER2表达和EGFR突变关系 HER-2蛋白在中晚期肺腺癌中表达较普遍，其主要分布于细胞膜， EGFR突变阳性的中晚期肺腺癌患者组织中过表达率为33.33%(28/84)，阴性突变的中晚期肺腺癌患者组织中过表达率为27.03%(20/74)。 通过对 EGFR突变的中晚期肺腺癌 HER-2免疫组化结果分析发现 HER-2蛋白在大于50岁患者中表达明显高于小于等于50岁患者(P＜0.05)，在高分化患者中的过表达率高于中低分化患者，但差异无统计学意义(P＞0．05)。 对 EGFR突变与无突变中晚期肺腺癌总体统计及依据临床病理特征进行分层统计分析均发现HER2过表达与EGFR状态可能不相关（P＞0．05）。 不同类型的EGFR突变HER-2蛋白表达不同，敏感突变的21外显子突变患者 HER-2蛋白过表达率明显高于19外显子突变患者，但未达到统计学意义（P=0.136）。 HER2表达阴性患者平均服用EGFR-TKI的时间略长于HER2表达阳性患者。绘制生存分析图发现， HER2非过表达患者生存时间与HER2过表达患者的生存时间未发现统计学差异。 2.肺腺癌细胞株HER2和EGFR突变关系分析及赫赛汀对HER2高表达细胞生长影响。 RT-PCR检测肺腺癌细胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975的HER-2 mRNA表达。RT-PCR结果显示，各非小细胞肺癌细胞株中的HER2表达水平不一，其中H1975的HER2表达最高，A549表达最低，H1975细胞的HER2平均表达水平是A549细胞的18.87倍。EGFR突变型细胞系普遍比EGFR野生型细胞系中HER2表达高。 通过Western Blot研究肺腺癌细胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表达情况。Western blot实验结果显示Erbb2（HER2）在各非小细胞肺癌细胞株中表达存在差异，Erbb2蛋白表达水平与 RT-PCR一致,在EGFR突变型的细胞株中总体的Erbb2蛋白表达水平明显高于EGFR野生型的细胞株。Erbb2在HCC827、H1650、H1975这三细胞株表达高，A549表达最低。 通过生长抑制实验给予赫赛汀观察A549、H1299、PC9、H1975细胞株其生长变化。生长抑制实验发现，在HER2高表达的非小细胞肺癌细胞株H1299、PC9、H1975中加入赫赛汀后，细胞生长受到明显的抑制。而在HER2相对低表达的A549细胞株中并未发现抑制现象。 【结论】： 1.中晚期肺腺癌患者中EGFR突变患者较无突变患者HER2表达有增高趋势，但未有统计学意义。 2.在EGFR突变中晚期肺腺癌患者中HER2过表达提示更易对EGFR-TKI耐药。3.赫赛汀能抑制HER2高表达的EGFR突变肺腺癌细胞生长。