副猪嗜血杆菌是引起格拉泽氏病的病原体,该病严重地威胁着全世界范围内的猪群,给养猪业带来了巨大的经济损失,临诊上多表现为多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。众所周知,副猪嗜血杆菌只有抵抗了宿主肺脏的吞噬作用才能产生系统性疾病,而肺脏的第一个防御机制是猪肺泡巨噬细胞,它在清除风媒传播的病原体和其他环境微生物中发挥了重要作用。有趣的是,高毒力副猪嗜血杆菌能够阻止猪肺泡巨噬细胞的吞噬作用,然而低毒力菌株则被猪肺泡巨噬细胞吞噬并清除。最近有文献报道称副猪嗜血杆菌感染PK-15细胞能够激活NF-κB信号通路,其机制是促进IκB的降解和p65的磷酸化,继而刺激多种炎性因子的产生介导炎性应答。然而,副猪嗜血杆菌感染的致病机制还不甚清楚。Coronin1A蛋白是哺乳动物coronin蛋白质家族的一员,也称为TACO或p57蛋白,主要表达于造血组织及细胞中,主要分布于细胞胞浆中。Coronin1A被认为在T淋巴细胞活化、迁移、存活和钙离子信号转导中发挥了重要作用。先前的文献报道称人源Coronin1A与致病性结核分枝杆菌在机体内存活有关,其中Coronin1A在结核分枝杆菌感染过程中主要参与调节吞噬小体与溶酶体的融合形成吞噬溶酶体的过程。另外,在麻风分枝杆菌感染过程中,人源Coronin1A也被认为是能够抑制Toll-2受体介导的NF-κB信号通路。因此,Coronin1A蛋白在细菌感染过程中能够通过调节机体免疫应答和吞噬过程而有助于细菌逃避宿主的清除作用。在实验室前期研究中,我们首先从感染副猪嗜血杆菌的肺泡巨噬细胞中克隆到了Coronin1A基因,在基因芯片中其转录水平的表达是上调的。为了调查猪Coronin1A基因在副猪嗜血杆菌感染过程中的分子机制,我们研究了猪Coronin1A在吞噬溶酶体形成和先天免疫应答相关的NF-κB信号通路的作用。主要研究内容如下：1.猪Coronin1A在副猪嗜血杆菌感染过程中可能参与阻止吞噬溶酶体的形成我们运用免疫组化和STRING分析发现Coronin1A在感染副猪嗜血杆菌的淋巴结、脾脏和肺脏中是上调表达的,说明猪Coronin1A与副猪嗜血杆菌感染相关。另外,我们发现了7个与Coronin1A相关的上调表达的差异表达基因,分别是Slc9a3r1、 Ltb、I1-1β、Fcgr2β、Ly86、Cd14和Cc14,它们可能有助于副猪嗜血杆菌抵抗机体的吞噬作用或免疫应答。再者,亚细胞定位结果表明猪Coronin1A主要分布于胞浆内,与微管蛋白部分共定位,微管蛋白与形成吞噬溶酶体的皮质微管网络相关。最重要的是,Coronin1A在感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨噬细胞中定位的结果显示,Coronin1A蛋白聚集于吞噬有活的副猪嗜血杆菌的吞噬小体上。相反,Coronin1A蛋白起初聚集于吞噬有热致死细菌的吞噬小体上,随即迅速从吞噬小体上离解开来,继而菌体被运送到溶酶体中,在吞噬溶酶体的作用下被机体清除。2.猪Coronin1A在副猪嗜血杆菌感染过程中有助于抑制NF-κB信号通路我们通过相对定量PCR和LPS、Poly(I:C)体外刺激实验,发现猪Coronin1A主要表达于造血组织及细胞中,而免疫刺激实验发现LPS和Poly (I:C)均能够在体外刺激猪Coronin1A基因的表达。另外,猪Coronin1A能够抑制NF-κB的激活,其机制是通过抑制IκBα的降解和p65的核转位。并且猪Coronin1A的过表达能够通过抑制NF-κB信号通路从而导致NF-κB调控的下游炎性因子(IL-6、IL-8和COX-2)的下调表达。再者,我们研究发现猪Coronin1A在副猪嗜血杆菌感染过程中能够抑制NF-κB信号通路,从而介导机体的免疫应答。