匍匐翦股颖、沟叶结缕草离体培养与遗传转化初步研究

来源 :浙江大学农业与生物技术学院 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yt58458665
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匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera L.)是多年生匍匐茎型草本植物,可形成细致、平整均一,致密如绿色地毯的草坪坪面,是高尔夫球场的首选草种。沟叶结缕草(Zoysia matrella(L.)Merr.),又称马尼拉草,是我国南方大部分地区草坪的主要栽培种。筛选与培育优良的草坪草品种是草坪业的重要任务。本论文主要分成以下三部分:第一部分以匍匐翦股颖L-93的种子为外植体,系统比较了不同蔗糖浓度、不同生长调节剂的组合和浓度、暗培养,以及不同添加物对愈伤组织诱导的影响。第二部分以匍匐翦股颖细叶突变体的匍匐茎为外植体,系统比较了不同生长调节剂的组合和浓度,不同蔗糖浓度,不同固化物以及外植体不同位置的茎节对愈伤组织诱导的影响。第三部分以匍匐翦股颖、沟叶结缕草的愈伤组织,匍匐翦股颖细叶突变体、沟叶结缕草的匍匐茎为材料,初步进行了农杆菌(dgrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化。主要研究结果如下:1.在试验1中,随着蔗糖浓度的升高,愈伤组织的诱导率是先升高,后降低。以蔗糖浓度为40g/L时,愈伤组织的诱导率最高。在9种不同的生长调节剂配比中,2 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L 6-BA的配比对匍匐翦股颖种子诱导愈伤组织的效果是最佳。试验还发现暗培养、在培养基中添加椰乳和脯氨酸对愈伤组织的增殖有明显的促进作用。2.在试验2中,发现2 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L 6-BA的生长调节剂组合中匍匐茎愈伤组织诱导率最高。生长素与细胞分裂素的浓度之比也影响着愈伤组织的诱导,以2 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L 6-BA组合的培养基愈伤组织诱导率最高。在试验设计的6种蔗糖浓度中,40g/L是匍匐茎诱导愈伤组织最有效的蔗糖浓度。在4种固化物的比较中,愈伤组织诱导率最高的是Phytagel。在茎节的不同位置中,离顶端最近的茎节愈伤组织诱导率最高。3.在试验3中,通过对匍匐翦股颖和沟叶结缕草的愈伤组织的筛选,当草甘膦浓度为1.0mM时,匍匐翦股颖和沟叶结缕草的再生率分别为15.5%和4.5%;当草甘膦浓度为2.0mM时,匍匐翦股颖和沟叶结缕草的再生率分别为8.75%和1.78%。通过对匍匐翦股颖和沟叶结缕草的匍匐茎的筛选,仅在草甘膦浓度为1.0mM时,匍匐翦股颖细叶突变体有一株再生,再生率为1.2%。
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