JG3抑制Heparanase介导的细胞粘附及其机制研究

来源 :中国科学院上海药物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aminhao
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在肿瘤转移过程中,细胞与细胞外基质的黏附发挥着极其重要的作用。肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用有助于肿瘤细胞穿过基底膜。Heparanase是细胞用以降解硫酸乙酰蛋白聚糖从而破坏胞外基质的糖苷内切酶,大量证据表明,heparanase在肿瘤转移中扮演着极其重要的角色,从而被认为是一个很有希望的抗肿瘤转移靶点。近来研究,heparanase同样也能在细胞内发挥生物活性,尤其能增强细胞的黏附能力,促进integrinβ1的活化、FAK磷酸化和Rac的激活。本实验室建立了基于荧光HPLC的heparanase酶活检测系统,筛选了由海洋来源的系列褐藻寡糖,获得了具有良好heparanase酶活抑制作用的寡糖分子JG3。前期实验结果表明,JG3在体内外均表现出明显的抑制肿瘤细胞运动的作用。基于heparanase主要参与介导细胞的浸润行为,JG3单纯的靶向heparanase的底物降解酶活作用不能完全解释其突出的抗肿瘤细胞运动的生物学特性,于是我们试图从细胞黏附抑制的角度,进一步阐释JG3抑制肿瘤细胞运动的机制。   利用逆转录病毒感染方法,建立了稳定高表达heparanase的CHO-K1细胞株,考察了高表达组和对照组在各种细胞外基质上的黏附状况。进一步观察了JG3对heparanase介导的细胞黏附的影响,发现JG3不能抑制细胞黏附的起始事件,但能heparanase依赖的抑制细胞黏着斑的形成和细胞的铺展过程。   在此基础上,分别用流式细胞术和westernblot检测了黏附信号通路中的重要分子,如integrinβ1、Src、FAK等的活化情况。结果发现,JG3并不影响integrinβ1和Src的活化,但能抑制人工构建的高表达heparanase的CHO-K1细胞(CHO-HPA)中FAK861位点的磷酸化,以及FAK下游的Erk磷酸化,继而抑制黏附信号下游与细胞运动相关的Rho家族蛋白Rac和RhoA的活化水平。   上述结果表明,JG3能heparanase依赖的抑制integrin介导的细胞黏附信号通路的传导,抑制黏着斑的形成,从而影响细胞的运动能力,该结果为JG3抑制高表达heparanase细胞的运动能力提供了又一个实验证据。  
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