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第一章SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立目的:利用SD大鼠建立局灶性脑缺血再灌注模型方法:取36只SD大鼠,雌雄不限,月龄5-6个月,体重250-300克.按随机原则分为三组:正常对照组,假手术组,缺血再灌注组,每组12只大鼠;应用改良的Longa法将缺血再灌注组大鼠建立局灶性缺血再灌注模型,假手术组仅暴露颈部动脉,正常对照组不做处理,于3d后从术后症状、脑含水量、神经功能评分、TTC染色测量梗死面积等方面评估模型的可行性。结果:缺血再灌注组大鼠的脑含水量、梗死面积大于正常对照组、假手术组,神经功能评分低于正常对照组和假手术组,术后症状明显重于后二组。结论:应用改良的线栓法建立缺血再灌注模型,成功率高,死亡率低,可重复性好,为进一步实验打下了可靠的基础。第二章促红细胞生成素在脑缺血再灌注损伤中对神经细胞线粒体的抗氧化效应目的:研究促红细胞生成素在脑缺血再灌注中对神经元线粒体的抗氧化效应方法:取40只SD大鼠,雌雄不限,月龄5-6个月,体重250-300克。随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组4组,每组10只。EPO治疗组在缺血后1小时、24小时、48小时、60小时腹腔注射EPO,剂量为3000U/Kg,用生理盐水以1:1比例稀释,缺血再灌注组仅腹腔注射同等剂量的生理盐水。假手术组仅分离颈部动脉,不做栓塞处理;正常对照组在断头前不做任何干预处理。再灌注后72小时观察各组大鼠脑组织神经细胞线粒体丙二醛、超氧化物歧化酶、Na+-K+-ATP酶活性、NO含量的变化。结果:线粒体内的超氧化物歧化酶、Na+-K+-ATP酶活性:EPO治疗组显著高于缺血再灌注组;EPO治疗组的线粒体丙二醛明显低于缺血再灌注组,以上差异均有统计学意义。结论:EPO通过抑制神经元线粒体的脂质过氧化反应,减少自由基生成,促进自由基清除剂的生成,减少神经细胞NO的生成,稳定线粒体的能量代谢功能,增加ATP的生成,从而起到保护神经元的作用。第三章促红细胞生成素在脑缺血再灌注损伤中对神经细胞线粒体功能和结构的保护作用目的:研究促红细胞生成素在脑缺血再灌注中对神经元线粒体功能和结构的保护作用方法:取40只SD大鼠,雌雄不限,月龄5-6个月,体重250-300克。随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组4组,每组10只。EPO治疗组在缺血后1小时、24小时、48小时、60小时腹腔注射EPO,剂量为3000U/Kg,用生理盐水以1:1比例稀释,缺血再灌注组仅腹腔注射同等剂量的生理盐水。假手术组仅分离颈部动脉,不做栓塞处理;正常对照组在断头前不做任何干预处理。再灌注后72小时观察各组大鼠脑组织神经细胞线粒体膜电位、线粒体Na+-K+-ATP酶活性、免疫组化检测海马区Caspase-3阳性细胞数和电镜观察神经元线粒体超微结构的变化。结果: EPO治疗组的线粒体膜电位显著高于缺血再灌注组;EPO治疗组表达Caspase-3阳性细胞数明显低于缺血再灌注组;电镜结果:缺血再灌注组神经元呈现细胞凋亡改变,EPO治疗组神经元呈轻度水肿改变。结论:EPO在缺血再灌注损伤中神经元有重要保护作用。其机制有:1.稳定Na+-K+-ATP酶活性,保证ATP的生成,稳定线粒体的能量代谢功能;2.稳定△Ψm,抑制Caspase-3蛋白酶的激活,抑制神经细胞的凋亡。