论文部分内容阅读
目的对人胃癌组织中的间充质干细胞(mesenchymal stem cells from human gastric cancer, hGC-MSCs)及人胃癌癌旁组织中的间充质干细胞(mesenchymal stem cells from human gastric cancer adjacent non-cancerous tissues, hGCN-MSCs)进行分离培养,并对分离培养的间充质干细胞进行形态学观察及鉴定,研究分析hGC-MSCs的生物学特性,为hGC-MSCs在肿瘤微环境中对胃癌细胞影响作用的研究提供研究基础,为间充质干细胞临床应用安全性问题提供理论依据。方法采集胃癌患者术后标本16例,分别采用组织块贴壁培养法和酶消化培养法从新鲜的胃癌组织及癌旁组织中分离培养间充质干细胞；观察hGC-MSCs的细胞形态；细胞计数法分别计数两种方法分离培养的第3代和第18代hGC-MSCs种板后不同时间的细胞数目,以绘制细胞的生长曲线,并分析比较各生长曲线之间的差异；核型分析并观察hGC-MSCs的染色体数目及染色体G显带情况；流式细胞仪检测hGC-MSCs表面标志物的表达情况；诱导hGC-MSCs分别分化为成骨细胞、成脂肪细胞,以鉴定hGC-MSCs是否具有多向分化能力。结果两种分离培养方法均可从人胃癌组织中分离培养出hGC-MSCs,但是均未能在胃癌癌旁组织中分离培养得到hGCN-MSCs; hGC-MSCs形态在倒置相差显微镜下呈长梭形或多角样,类似成纤维样细胞。细胞繁殖生长达到融合时,细胞平行排列呈漩涡状、放射状；细胞生长曲线显示细胞增殖迅速,具有很强的繁殖生长能力,两种分离方法得到的第3代hGC-MSCs生长曲线无明显差异,但细胞增殖能力随着传代有所降低,第18代hGC-MSCs生长扩增能力较第3代有所降低；核型分析显示hGC-MSCs是正常的二倍体,无染色体缺失及显带异常；hGC-MSCs表面抗原检测结果显示细胞表面高表达CD13. CD44和CD90,但是低表达CD45、CD34、 HLA-DR;诱导分化实验显示hGC-MSCs具有多向分化的潜能,在体外诱导分化液中,能成功分化为成骨细胞和脂肪细胞等细胞。结论在人体胃癌组织中确实存在间充质干细胞(hGC-MSCs), hGC-MSCs在胃癌组织中参与构成胃癌微环境,hGC-MSCs具有与文献报道的正常组织来源的间充质干细胞(如人骨髓来源的MSCs)相似的细胞形态、生物学特性、多向分化能力及强大的增殖能力。hGC-MSCs存在于胃癌微环境中,可能参与胃癌的发生发展过程,hGC-MSCs分离培养及研究,对胃癌的研究及间充质干细胞的临床应用有重要价值。