【摘 要】
：
目的:牙龈卟啉单胞菌是牙周炎的重要致病菌,能够通过被机体免疫系统识别,诱发炎症反应,破坏牙周骨组织的平衡。为研究牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）感染后牙周炎症环境对成骨分化的影响,本实验以P.gingivalis诱导巨噬细胞极化并提取巨噬细胞外泌体,使其作用于人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,观察P.gingivalis感染巨噬细胞的外泌体对hBMSCs的成骨分化的影响。方法:实验为分
【基金项目】
：
国家自然科学基金,81970942； 辽宁省教育厅科学研究项目,JC2019024；
论文部分内容阅读
目的:牙龈卟啉单胞菌是牙周炎的重要致病菌,能够通过被机体免疫系统识别,诱发炎症反应,破坏牙周骨组织的平衡。为研究牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）感染后牙周炎症环境对成骨分化的影响,本实验以P.gingivalis诱导巨噬细胞极化并提取巨噬细胞外泌体,使其作用于人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,观察P.gingivalis感染巨噬细胞的外泌体对hBMSCs的成骨分化的影响。方法:实验为分5组:P.gingivalis诱导巨噬细胞极化形成的外泌体Exo-M1（P.gingivalis）、脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞极化形成的外泌体组（阳性对照组）Exo-M1（LPS）,未极化巨噬细胞形成的外泌体组Exo-M0,未加入外泌体的成骨诱导组Negative Control和未成骨诱导的空白组Blank Control。具体实验方法:（1）巨噬细胞的诱导与极化:采用P.gingivalis以MOI 100:1诱导巨噬细胞分化成为M1（P.gingivalis）作为实验组细胞,200ng/ml LPS诱导巨噬细胞为M1（LPS）作为阳性对照组细胞。以RT-PCR检测TNF-α、IL-1β鉴定巨噬细胞极化。（2）巨噬细胞外泌体的提取与鉴定:超高速离心法提取M1（P.gingivalis）、M1（LPS）以及未经诱导的M0组上清中的外泌体。用NTA检测外泌体粒径、扫描电镜观察外泌体形态和Western Blot鉴定外泌体标志性蛋白分子CD9、TSG101、HSP70的表达。（3）巨噬细胞外泌体对hBMSCs成骨分化的影响:外泌体刺激hBMSCs。在成骨诱导的7、14天进行碱性磷酸酶染色和碱性磷酸酶活性检测。（4）在成骨诱导第14天进行茜素红染色检测成骨矿化结节的形成。（5）在成骨诱导第21天RT-PCR检测成骨指标ALP、RUNX-2、COL1-A1和OCN的基因表达（6）在成骨诱导21天进行Western Blot检测成骨指标RUNX-2和Osterix。结果:（1）人单核细胞U937经诱导后成为巨噬细胞。RT-PCR检测显示M1（P.gingivalis）和M1（LPS）组TNF-α和IL-1β表达水平显著升高。（2）经NTA检测外泌体粒径在50-200nm之间、扫描电镜观察外泌体形态、Western Blot鉴定CD9,TSG101及HSP70阳性表达。（3）在成骨诱导的7、14天进行碱性磷酸酶染色和碱性磷酸酶活性检测,显示Exo-M1（P.gingivalis）组碱性磷酸酶活性显著高于其余对照组（P＜0.05）。（4）在成骨诱导第14天进行茜素红染色检测成骨矿化结节的形成,显示Exo-M1（P.gingivalis）组矿化结节形成显著多于对照组。（5）在成骨诱导第21天RT-PCR检测成骨指标ALP、RUNX-2、COL1-A1和OCN的基因表达,显示Exo-M1（P.gingivalis）组ALP、RUNX-2的表达显著高于对照组（P＜0.05）,COL1-A1和OCN表达低于对照组（P＜0.05）。（6）在成骨诱导21天进行Western Blot检测成骨指标RUNX-2和Osterix,显示Exo-M1（P.gingivalis）组RUNX-2的表达高于对照组（P＜0.05）,Osterix表达低于对照组（P＜0.05）。结论:牙龈卟啉单胞菌刺激巨噬细胞分泌的外泌体促进人骨髓间充质干细胞细胞成骨分化的早期指标的表达,抑制了成骨晚期骨细胞的成熟。牙龈卟啉单胞菌诱导巨噬细胞产生的外泌体干扰了牙周组织的稳态,从而影响了牙周骨组织的形成。
其他文献
目的:低强度脉冲超声波（low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS）是一种在骨再生领域广泛应用的物理学疗法。本组前期实验对LIPUS作用下多孔钛合金支架材料上成骨细胞的生物学行为展开了体内外研究,发现在兔颌骨缺损模型中,LIPUS可以促进新骨形成及血管生成,然而这种作用的机制还没有完全阐明。血管生成-成骨耦合指骨折愈合过程中骨再生和血管生成之间密切的空间和时间联系,
目的:成骨细胞在骨重塑逆转阶段抑制破骨细胞生成,其机制尚不明确。研究证明,成骨细胞经由近分泌及旁分泌途径调控破骨细胞的生成,近分泌是指成骨细胞通过膜表面受体如促红细胞生成肝细胞激酶受体（Ephrin receptor B4,Eph B4）与破骨细胞膜表面配体Ephrin B2结合,抑制破骨细胞生成;旁分泌是指成骨细胞分泌可溶性蛋白如核因子κβ受体活化因子配体（Receptor Activator
目的:头颈癌是全球第六大常见的癌症,其中超过90%为鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）。HNSCC患者的预后较差,主要原因是肿瘤早期即出现侵袭和转移。肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）是肿瘤细胞赖以生存的基础,其中存在着大量的免疫细胞。巨噬细胞是TME中最为丰富的细胞类型,其中M2型巨噬细胞已被证实可
目的：设计制备适用于离断型外周神经损伤（peripheral nerve injuries,PNI）治疗的组织工程神经支架是神经再生医学领域的热点问题。细胞外基质（extracellular matrix,ECM）是由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质构成的复杂网架结构,形成细胞生存适宜微环境,在组织发育与再生中发挥关键作用。脱落乳牙干细胞（stem cells from exfoliated d
＜正＞在生物试题中与模型建模相关的试题往往是重点和难点.此类试题显著的特点是附有模型，题干通常是在一定的情境下对模型的说明，选项则是根据模型提出的.模型是对认识对象本质特征的一种概述，通常用来描述与生命有关的生物现象和用于活动规律的研究.为了概念的建构和理解并要直观简单化的反映生物事实，常常借助于模型.教学中以科学、准确、美观、创新为原则开展的建模活动，就是要把抽象的或不易观察的事物概述出来，不仅
目的 观察产前超声透明隔腔水平横切面用于诊断胼胝体发育不全（ACC）的价值。方法 纳入26胎ACC胎儿（ACC组）,以90胎正常胎儿作为对照组。根据对照组颅脑容积数据对透明隔腔水平横切面进行再认识，观察其中胼胝体压部声像图特征并进行组间比较；分析ACC组内低回声带消失或前移率与常规间接征象（侧脑室扩张、透明隔腔变小或消失）的检出率的差异。结果 透明隔腔水平横切面于对照组90胎均显示胼胝体压部，表现
目的:本研究旨在开发一种模型,在口腔疾病治疗前自动检测磁共振影像中颞下颌关节盘前移位,以降低不恰当的口腔治疗操作后发生严重并发症的风险。研究方法:以507名颞下颌关节紊乱病患者的MRI资料为输入,构建3套深度学习模型自动检测关节盘前移位。深度学习模型是使用基于Res Net架构和“Imagenet”数据库的卷积神经网络开发的。五倍交叉验证、过采样和数据增强技术被应用来降低模型过度拟合的风险。比较三
目的:颌骨囊肿及成釉细胞瘤的术前鉴别对于治疗决策至关重要。在本研究中,我们希望开发并验证一个基于CBCT图像的影像组学模型对下颌骨囊肿及成釉细胞瘤进行鉴别。研究方法:回顾性分析281例经组织病理证实为颌骨囊肿（200例,其中颌骨非角化囊肿100例,角化囊肿100例）及成釉细胞瘤（81例）患者的临床资料和CBCT图像。将下颌骨囊肿及成釉细胞瘤患者分为三组进行两两鉴别,（组1:颌骨非角化囊肿+角化囊肿
目的:本研究的目的是通过Meta分析的方法回顾相关文献,比较缺损修复重建中单穿支皮瓣与多穿支皮瓣的皮瓣坏死发生率之间的差异,为游离组织修复重建的皮瓣制取过程提供更优选择。方法:我们通过检索Pub Med,Web of Science,EMBASE,中国生物医学文献数据库（CBM）和Cochrane图书馆数据库中截止于2021年6月30日之前的文献,筛选出包含有单穿支皮瓣与多穿支的穿支皮瓣皮瓣局部坏
目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是牙周炎进展的重要病原菌之一,可以进入血液循环造成菌血症,研究表明P.gingivalis菌体成分、毒力因子等在大脑海马组织中被检出。神经退行性疾病的发生发展与成年海马神经发生（adult hippocampal neurogenesis,AHN）密切相关,而AHN过程经历从糖酵解到有氧磷酸化的转变。