下调wnt-2基因表达对MGC803生长增殖的影响

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目的:针对wnt-2基因序列,设计与构建siRNA干扰序列,瞬时转染胃癌MGC-803细胞,研究wnt-2基因表达降低对MGC-803细胞生长增殖及迁移的影响,探讨wnt-2基因与胃癌的关系。方法:采用生物信息学分析,筛选特异的wnt-2基因siRNA干扰序列,公司合成靶向wnt-2基因的siRNA干扰序列,用Lipofectamin2000介导瞬转胃癌MGC-803细胞系;并将转染wnt-2siRNA的细胞作为wnt-2siRNA组,转染scramble siRNA的细胞为scramble组,未转染的细胞为空白对照组。细胞转染后分别通过RT-PCR和Western blot实验检测各组胃癌细胞中wnt-2基因的mRNA和蛋白表达水平。利用划痕试验比较各组胃癌MGC-803细胞系的迁移能力;MTT试验观察各组细胞的生长情况。结果:1.RT-PCR结果显示,wnt-2siRNA组较scramble组和空白对照组wnt-2基因在mRNA水平降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。2.Western blot结果显示, wnt-2蛋白在wnt-2siRNA组中表达较scramble组和空白对照组降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。3.MTT检测结果显示:转染48小时后,wnt-2siRNA组OD值(0.23±0.03)与scramble组(0.42±0.01)、空白对照组(0.47±0.03)对比,细胞生长增殖速度下降(p<0.05),转染72小时后wnt-2siRNA组(0.35±0.02)与scramble组(0.70±0.04)、空白对照组(0.72±0.02)对比,细胞生长增殖速度显著下降(p<0.05),scramble组与空白对照组细胞增殖能力无明显差异(p>0.05)。4.划痕实验结果显示:划痕48小时后wnt-2siRNA组MGC-803细胞愈合率(18%±2.0%)较scramble组(41%±3.3%)及空白对照组(53%±2.7%)低,72小时后,wnt-2siRNA组MGC-803细胞愈合率(25%±2.5%)明显低于scramble组(63%±2.6%)及空白对照组(69%±3.3%),差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.下调wnt-2基因能够显著抑制胃癌细胞MGC-803的生长增殖和迁移能力。
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