鹿茸与鹿胎含有丰富的活性成分,具备广泛的药理作用,而且是一种传统延缓衰老药物。运用现代生物学方法研究鹿茸、鹿胎的抗衰老作用,对于促进相关功能产品的开发及养鹿业的发展具有积极意义。本课题对干鹿茸、鲜鹿茸、鹿胎盘的水溶性与脂溶性活性成分进行浸提,通过测定3T3-L1细胞毒性与凋亡情况、体外抗氧化能力、秀丽隐杆线虫生命周期以及自然衰老的C57BL/6小鼠相关生理生化指标,全面考察了鹿茸与鹿胎提取物的抗衰老作用。研究结果如下:1.由于鹿茸与鹿胎中活性成分绝大部分为水溶物或脂溶物,本研究以水和乙醇为浸提溶剂。经冷冻干燥获得的干鹿茸、鲜鹿茸、鹿胎盘水溶物的提取率分别是 3.944%、14.202%、45.652%,其中总蛋白含量分别为 28.87%、71.11%、58.21%,经SDS-PAGE检测,其蛋白分子量分布在26-180 kDa范围内;三种原料的脂溶物经减压旋转蒸发的得率分别为3.83%、4.29%、11.44%,总磷脂含量分别为 14.877 mg/ml、23.378 mg/ml、35.962 mg/ml。2.考虑到人体的血药毒性与体外细胞毒性有关,检测了六组提取物对3T3-L1的细胞毒性。发现水溶物、脂溶物分别在0.5mg/ml、0.1 mg/ml及其以下浓度时基本没有细胞毒性,而且会出现促进细胞增殖的情况。结合流式细胞术对细胞凋亡情况进行分析,我们推测该提取物可能具有抑制细胞自发凋亡的潜能。3.以检测自由基清除能力的DPPH清除法及评价物质还原能力的CUPRAC法考察鹿茸与鹿胎提取物的体外抗氧化能力。不同浓度提取物的抗氧化能力呈现—定剂量依赖关系,其中0.5 mg/ml WFA及0.1 mg/ml EF的DPPH清除率分别为42.17%、21.58%,.TEAC 值分别为 325.56 μM、113.36 μM。4.首次以秀丽隐杆线虫模型对鹿茸与鹿胎提取物抗衰老作用进行了研究,结果显示0.5 mg/ml的鲜鹿茸水溶物及0.1 mg/ml的鹿胎脂溶物能够明显延长线虫的寿命。EF组的平均寿命与最大寿命分别为25.16天、34.36天,而WFA组分别为26.64天、36.44天。另外,两组提取物还能够改善线虫的移动能力,并使线虫抵抗热胁迫环境的能力有所提高;对线虫产卵量的统计结果显示,鹿茸与鹿胎提取物可能通过抑制线虫生殖能力而发挥抗衰老作用。检测OP50的生长曲线显示,两组提取物对线虫生命周期的干预与OP50的OD值无关。5.对自然衰老的C57BL/6小鼠灌胃21天后,测定小鼠血清及肝、脑中相关衰老指标的变化。实验组小鼠血清中T-CHO、TG有所下降;同时测定血清及肝、脑组织中SOD与MDA的含量,发现实验组SOD的活力有不同程度的提高,而MDA的含量则显著降低。另外,与对照组相比,实验组小鼠血清及肝、脑组织中GSH-Px、CAT均呈不同程度的提高。通过以上研究,本课题发现鲜鹿茸水提物与鹿胎脂溶物延缓衰老的作用效果最明显。其机理可能与这两种提取物能够提高机体抗氧化能力、促进细胞增殖、抑制细胞自发凋亡、调节体内生化代谢过程等作用有关。本课题为深入研究鹿茸与鹿胎的抗衰老功能奠定了理论基础,为相关抗衰老产品的开发提供了理论依据。