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MicroRNAs(miRNAs)是内源性的调节基因转录后水平的一类小分子RNA。NAC转录因子是一类在植物抗逆信号网络中发挥多种生物学功能的转录因子,干旱、盐碱等逆境胁迫能够诱导植物表达该基因。研究表明miRNA164的靶基因NAC在模式植物拟南芥中参与调控植物的生长发育以及对生物和非生物胁迫的耐受性。目前在马铃薯中关于miRNA164参与调控NAC表达模式的研究尚未见报道。本研究利用mi RNA164/NAC表达模式的保守性,用马铃薯中已知的miRNA164序列,通过在线工具对其靶基因进行预测并克隆获得了其靶基因NAC262,构建了其植物表达载体,转化马铃薯栽培品种“克新3号”获得了转基因植株。另外,利用人工miRNA(artificial mi RNA,amiRNA)技术构建了马铃薯mi RNA164表达载体,并转化马铃薯栽培品种“甘农薯2号”获得了转基因马铃薯植株。通过转基因植株NAC262基因表达量的qRT-PCR分析和形态学的观察对miRNA164/NAC的表达模式进行了研究。取得的主要结果如下:1.通过在线工具psRNATarget对miRNA164靶基因进行预测得到3个靶基因。通过生物信息学分析发现,这3个靶基因均属于NAC转录因子家族的NAM亚家族,且基因结构具有很高的保守性。2.以NCBI登记的马铃薯NAC262基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR技术获得了马铃薯转录因子基因NAC262的cDNA序列,并构建了CaMV 35S启动子驱动的NAC262基因的植物表达载体pCPB-NAC262;以马铃薯栽培品种“克新3号”无菌试管苗为实验材料,用农杆菌介导法进行遗传转化,经卡那霉素抗性筛选和PCR鉴定获得了8株转基因植株。3.利用人工miRNA技术构建了CaMV 35S驱动的马铃薯mi RNA164的人工表达载体pCPB121-miR164,以马铃薯栽培品种“甘农薯2号”无菌试管苗为实验材料,经农杆菌介导法的遗传转化获得了10株转基因植株。4.用PEG6000对转基因植株进行胁迫处理,利用qRT-PCR对NAC262基因表达量分析结果显示:在20%的PEG胁迫下,0-8 h内NAC262基因表达量呈现上升的趋势,在胁迫达到8 h时NAC262基因表达量达到了最大值,在8-32 h时,NAC262基因表达量呈现下调的趋势;NAC262基因在胁迫的各个时间段根部的表达量高于茎叶组织。转mi RNA164基因株系T1和T2在PEG胁迫下,NAC262基因相对表达量明显低于非转基因“甘农薯2号”植株;而转NAC262基因株系T3和T4在PEG胁迫下,NAC262基因相对表达量明显高于非转基因“克新3号”植株。5.对每个株系随机的5株进行侧根数目和侧根长度统计发现:与非转基因对照相比,转miRNA164基因的“甘农薯2号”株系T1和T2侧根的数目明显的减少,但侧根的长度无显著的变化;而转NAC262基因的“克新3号”株系T3和T4与非转基因植株相比,侧根的数目明显的增多,根的长度变短,且叶片变大,茎秆加粗。综上所述,NAC262转录因子能够调控植物侧根的发育,且表达受到miRNA164的调控,miRNA164/NAC的表达模式存在高度的保守性,与拟南芥的类似,同时受PEG胁迫的诱导而参与了植物对干旱胁迫的响应。