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组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)又称胎盘蛋白-5(placenta protein-5, PP-5)和基质相关丝氨酸蛋白酶抑制剂(matrix associated serine protease inhibitor, MSPI),是一种带有kunitz型结构域的蛋白酶抑制剂,属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员。成熟的人TFPI-2由富含酸性氨基酸的N端、三个串联的kuntiz结构域和富含碱性氨基酸的C端组成,能抑制胰蛋白酶、纤溶酶、糜蛋白酶、血浆缓激肽释放酶、组织蛋白酶G和多种基质金属蛋白酶(MMPs)的活性,从而对抗多种恶性肿瘤的侵袭转移。TFPI-2与同家族的组织因子途径抑制物-1(TFPI-1)结构相似,功能部分相同,也是一种重要的抗凝物质,对凝血因子VIIa (FVIIa)/组织因子(tissue factor, TF)复合物和凝血因子Xa (FXa)等均有不同的抑制作用。但迄今为止,TFPI-2的生理功能尚不清楚, TFPI-2与其它蛋白质相互作用的信息也知之有限。我们运用Matchmaker 3酵母双杂交系统,构建了pGBKT7/TFPI-2质粒载体。以此质粒为诱饵,从人胎脑cDNA文库中筛选出了95个蛋白编码基因,包括32个代谢相关基因(其中8个参与蛋白代谢,13个参与核酸代谢,11个参与糖代谢),21个信号传导相关基因,5个细胞生长与生存相关基因,7个运输相关基因,2个抗调亡相关基因,其余28个基因的功能不明确。通过分析相关蛋白的细胞定位、已知功能及文库载体在双杂交系统中正确表达的可能性等,进一步确定了8个可能与TFPI-2有潜在相互作用的蛋白。在此研究基础上,我们选择了RASSF1C和ASB两个蛋白,以确定它们与TFPI-2是否存在相互作用。ASB蛋白在成功拷贝基因,用PCR检测了36个阳性克隆均无目的条带。故我们将研究重点集中在确定TFPI-2是否与RASSF1C是否存在相互作用。我们采用不同颜色的荧光表达载体,分别构建了TFPI-2和RASSF1C的表达载体(融合表达),激光共聚焦显微镜观察发现两者存在共定位,免疫共沉淀方法确定TFPI-2与RASSF1C存在相互作用。丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶Ste20家族涉及多种信号通路,包括参与控制细胞迁移和极性的信号通路。Ste20家族可分为p21活化蛋白激酶(p21-activated kinases)和生发中心激酶(germinal center kinases, GCK)两个亚家族。GCK可进一步分为八个亚群,其中2和3亚群包括哺乳动物Ste20(mst)蛋白激酶、MST1、MST2、MST3、MST4和酵母Spsl/Ste20相关激酶1(YSK1,哺乳动物同源基因为SOK1)。YSK1也被称为Ste20氧化应激反应蛋白激酶1,可被活性氧中间体弱激活,但不能由任何其它环境压力,或生长因子激活。然而,该激酶不参与任何已知的蛋白激酶(MAPK)通路,且YSK1的生理功能不明。同YSK1一样,MST4过表达不能激活JNK和p38激酶途径,但可促进非锚定依赖性增生和肿瘤形成,并与前列腺癌进展有关。MST系列激酶YSK1和MST4与高尔基体基质蛋白GM130存在信号功能联系,后者在控制细胞迁移和极化中发挥作用。已发现YSK1和MST4位于高尔基体,YSK1和MST4与高尔基体基质蛋白GM130存在相互作用。MST4与细胞迁移有关。我们发现YSK1与MST3存在相互作用,MST3对癌细胞迁移有影响。我们采用细胞sok1基因敲除的方法,证实了sokl参与乳腺癌细胞迁移。