肝细胞癌是一种发病率和死亡率呈逐年上升趋势,严重威胁人类健康的恶性肿瘤,肝癌的精准诊断有望提高患者的五年生存率。临床常用的血清诊断指标甲胎蛋白假阳性和假阴性率偏高,漏诊率高达80%。外泌体富含母细胞来源的各种蛋白质,被认为是癌症早期诊断的新型工具。本研究采用二氧化钛富集法提取血清外泌体蛋白,在非数据依赖性采集技术下进行蛋白质组学分析,通过生物信息学技术筛选与肝癌发生发展密切相关的外泌体蛋白,作为肝癌潜在生物标志物,为肝癌的诊断提供参考价值。本研究通过二氧化钛富集法稳定提取正常对照和肝癌病人血清中外泌体蛋白、通过FASP酶切得到肽段。肽段样本在非数据依赖性采集技术下进行质谱分析,获取蛋白质组学数据。通过差异倍数和P-value卡值标准,筛选显著差异的外泌体蛋白,并进行GO、KEGG、蛋白互作网络等生物信息学分析,进一步筛选与肝癌发生发展密切相关的外泌体蛋白。潜在生物标志物的基因水平在TCGA数据库中得到验证。扫描电镜和SDS-PAGE胶图显示,稳定提取到外泌体蛋白。正常对照中鉴定到478个蛋白,肝癌病人中鉴定到490个蛋白,正常对照和肝癌病人共鉴定到473个蛋白,其中343个为外泌体蛋白。对343个外泌体蛋白进行生物信息学分析、筛选,和正常对照相比,肝癌病人中有54个差异表达外泌体蛋白,包括24个上调外泌体蛋白和30个下调外泌体蛋白。差异外泌体蛋白的功能富集分析表明,大多数DEPs显著富集在细胞外区域,血液微粒,细胞外囊泡和细胞外空间。KEGG信号通路分析表明,DEPs主要富集在肝癌的补体和凝血级联,血小板活化和黏着斑等信号通路上。10个处于关键节点的DEPs（VWF,TGFB1,LGALS3BP,SERPINC1,HPX,HP,HBA1,FGA,FGG和FGB）被筛选为肝癌潜在的生物标志物。GEPIA中收录的基因表达数据显示,肝癌组织中VWF、LGALS3BP、TGFB1、SERPINC1的表达水平高于对照组;HPX、HP、HBA1、FGA、FGG和FGB表达水平低于对照组,与本研究中蛋白质组学结果保持一致。本研究结果提示血清外泌体蛋白可以作为肝癌诊断标志物筛选的工具;外泌体蛋白VWF,TGFB1,LGALS3BP,SERPINC1,HPX,HP,HBA1,FGA,FGG和FGB有望成为肝癌潜在生物标志物。