目的:　　 1、颞叶癫痫是一种难治性癫痫，是神经科常见的临床综合征，其发病机制尚未完全阐明。目前NF-κB在神经系统疾病中的作用是神经病学研究的热点之一，研究发现NF-κB通过介导免疫损伤，可造成脑损害;　　 2、探讨体外海马神经元癫痫的发病机制;　　 3、探讨无镁细胞外液诱导海马神经元放电后NF-κB的表达及活性的研究，并进一步验证体内大鼠癫痫模型中NF-κB表达结果的可信度，从而为临床抗癫痫药物提供一定的理论基础。　　 方法:　　 以体外原代培养的Sprague Dawley乳鼠（出生24小时之内）大脑海马神经元作为实验材料，体外培养7天后，进行实验。　　 1、细胞形态学观察:于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态，并采集各组细胞形态的图像。　　 2、免疫荧光染色法(MAP2)对体外培养的神经元进行纯度鉴定:用MAP2抗体标记神经元，DAPI染核，在荧光显微镜下观察，并采集图像。　　 3、利用膜片钳技术检测神经元痫样放电。　　 4、Western blot方法检测正常对照组和实验组NF-κB的表达水平。　　 5、免疫荧光染色法对实验组和对照组细胞内NF-κB的表达水平和亚细胞定位进行检测。　　 结果:　　 1、细胞形态学观察及神经元纯度鉴定:　　 正常神经元经体外培养48小时后大多数呈纺锤形，部分呈椭圆形或三角形，细胞突起可见，培养第7天时胞体立体感好，形态饱满，突起更丰富，相互交织成网络。采用神经元特异性抗体微管相关蛋白2(MAP2)进行免疫荧光染色（详见实验方法2），荧光倒置显微镜采集荧光信号，鉴定结果显示:培养第2天的神经元阳性率为50％～60％（图1），而培养第7天所得神经元阳性率达＞95％（图2）。无镁细胞外液处理的海马神经元生长状态良好，部分神经元胞体相互聚集，交织成神经网络。　　 2、膜片钳检测结果显示:　　 以正常组细胞作为对照组，在正常细胞外液中，电流钳记录到正常神经元偶然会有动作电位的发放，该动作电位的幅度范围为60～70mV。而经无镁细胞外液处理3h后再恢复到正常细胞外液的条件下，出现神经元持续强直高频爆发的“癫痫样”自发性放电，其电压幅度为60～80mV，频率大幅度提高。　　 3、Western blot印迹法显示:　　 Western blot结果显示无镁处理海马神经元组（实验组）与正常对照组NF-κB蛋白表达相对灰度值比较差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 4、免疫荧光方法检测细胞定位及表达水平正常对照组海马神经元NF-κB主要在胞浆表达，无镁处理实验组海马神经元NF-κB在胞核表达为主，提示神经元被活化，与western blot结果相一致。　　 结论:　　 1、在原代培养的海马神经元中，无镁细胞外液可诱导海马神经元产生稳定的、持续的体外神经元癫痫持续状态模型。该模型具有实验条件恒定、易控制、实验周期短的优点，所以是生理、药理、病理等研究领域的重要方法之一。　　 2、在原代培养的海马神经元中，Western blot实验结果显示:实验组（无镁处理组）NF-κB蛋白表达比正常对照组增加，差异具有明显的统计学意义(p＜0.05)。　　 3、在原代培养的海马神经元中，免疫荧光结果显示:正常对照组NF-κB蛋白主要在海马神经元胞浆表达，而实验组（无镁处理组）NF-κB蛋白主要在神经元胞核表达，提示神经元被活化，NF-κB发生核移位。　　 4、结合上述结果，提示NF-κB可能是参与癫痫活动的重要机制之一。