磁性/磁性荧光微球的制备及在转基因食品检测中的应用

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聚合酶链式反应(PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)是转基因食品检测的主要手段,其关键是从待检样品中快速高通量地提取到高质量的核酸,目前主要的核酸提取方法是十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法和各种试剂盒法,由于CTAB法和SDS法操作繁琐、需要使用有机溶剂并且不断离心,因而不能满足快速高通量的发展要求;而试剂盒法由于昂贵的价格也限制了它在日常检测中的应用;同时,基于核酸水平的转基因检测的发展趋势是多重检测,其关键是制备不同种类的荧光微球和对微球的特异探针的修饰。针对以上问题,本论文提出了以磁性分离技术为基础的核酸提取方法,该方法的关键是制备磁响应性高、单分散性良好和易于表面修饰的磁性微球;将该磁性微球用于大豆样品核酸提取进行综合评价;并针对多重检测制备了不同荧光性能的荧光微球。本文的研究目标主要包括三个方面:(1)通过热溶剂还原法制备磁响应性高、单分散性良好、可重复性高和易于修饰的磁性微球;(2)将磁性微球用于食品核酸提取中并进行综合评价,同时对核酸的特异性提取做了基础研究;(3)制备了不同荧光性能的荧光/磁性荧光微球。具体工作如下所述:首先采用热溶剂还原法制备了磁性微球,考察了不同的分散剂、还原剂和前躯体的种类及用量对磁性微球的形貌及分散性的影响,探讨了其反应机理。并且通过溶胶-凝胶法法对其表面修饰以制备不同官能团的磁性微球。其次,将此磁性微球用于大豆样品中核酸的提取,并将此方法与传统核酸提取方法和市售试剂盒对比进行综合评价;将磁性微球进行了链霉亲和素-生物素-ssDNA的修饰,考察了其对互补以及非互补ssDNA的提取效率。最后,为了进一步完善转基因食品检测体系,针对多重检测的模式的优点:(可以同时检测样品的内源基因与多个外源基因,既减少核酸模板的用量,又提高检测速度),通过层层自组装的方法制备了以聚苯乙烯为基质的荧光/磁性荧光微球,该荧光/磁性微球的荧光发射峰可以通过制备的荧光量子点的大小进行调节,使荧光微球具有不同的荧光性能从而得以区分。综上所述,本论文对基于磁分离技术的转基因食品的核酸快速提取以及多重检测方面做了初步探讨,为推动转基因食品核酸提取的自动化、高通量和核酸多重检测的发展做了基础研究工作。
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