背景:胆囊癌是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤,目前尚无特别有效的治疗方法。“肿瘤干细胞理论”为胆囊癌的治疗开辟了新思路。目的:证实胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着肿瘤干细胞,建立有效的胆囊癌肿瘤干细胞的分离方法并且初步分离、培养和鉴定胆囊癌肿瘤干细胞。方法:利用Cisplatin(顺铂)对原始GBC-SD细胞系进行第一步体外药物筛选,将药物处理后仍然存活的细胞进行致瘤性试验。应用Cisplatin对形成的肿瘤组织进行体内药物筛选,4周后将该肿瘤组织培养于肿瘤干细胞培养基内,观察细胞悬浮生长及细胞团(spheres)形成情况,然后用Cisplatin再次在体外进行药物筛选。最后应用实时荧光定量PCR检测筛选细胞的干细胞基因含量,并与正常培养的GBC-SD细胞系的干细胞基因含量相比较。结果:1)经Cisplatin处理后的GBC-SD细胞系内仍有部分细胞存活,并且具有较强的致瘤性,能在80%细胞注射点形成肿瘤;2)移植瘤经Cisplatin处理后缩小,但并未完全消失,可在无血清培养基内悬浮生长并增殖形成克隆性细胞团(spheres);3)悬浮细胞及细胞团经Cisplatin 30μmol/L处理后仍可在肿瘤干细胞培养基内形成典型的克隆性细胞团;4)最终筛选所得细胞群干细胞基因含量明显高于原始的GBC-SD细胞系。结论:1)胆囊癌GBC-SD细胞系内存在着一群具有肿瘤干细胞特性的细胞;2)利用无血清悬浮培养结合化疗药物体外、体内反复筛选的方法可分离出富含胆囊癌肿瘤干细胞的细胞群。