华北八宝再生过程中同工酶的研究

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本文以华北八宝[Hylotelephium tatarinowii (Maxim.) H. Ohba]野生植株叶片为材料,采用MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培养基诱导出愈伤组织,在MS培养基中进行增殖培养,将增殖后的愈伤组织接种在5种不同培养基和含有不同浓度的PEG6000的静置液态培养基中进行培养。采用愈创木酚法、NBT光化还原法、紫外吸收法分别测定愈伤组织中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性;采用非变性聚丙烯凝胶电泳法测定POD. SOD和酯酶(EST)的同工酶。对愈伤组织在不同培养条件下的生理生化指标进行比较研究,实验结果如下:1.在不同培养基中,愈伤组织的生长状态与POD. SOD. CAT三种同工酶的酶活性变化关系如下:POD酶活性的明显升高或者波动较大时,愈伤组织会出现玻璃化或者褐化的现象,POD酶活性基本稳定在初始状态的活性时,愈伤组织生长状态良好,不论POD酶活性的高与低,只要POD酶活性趋于相对稳定时,愈伤组织将会出现不定芽,在POD酶活性发生较大波动后再趋于稳定时,愈伤组织会生出现玻璃化的不定芽且不定芽的数量少;SOD酶活性越低,愈伤组织的褐化程度越严重,而在SOD酶活性相对稳定或者稳定升高的情况下都会出现出不定芽,但是在SOD酶活性偏高时产生的不定芽多为玻璃化不定芽且数量较少,随着SOD同工酶活性升高,不定芽增多;在培养过程中,CAT酶活性与SOD酶活性变化趋势大致相同,但是没有SOD酶活性变化明显。2.在5种培养基中培养的愈伤组织中,共检测出7条POD同工酶条带:条带2、3和7三条POD同工酶条带开始表达时,愈伤组织开始出现不定芽;条带4和6的相对定量升高和条带7的相对定量偏高时,出现褐化或者玻璃化现象。3.在5种培养基中培养的愈伤组织中,共检测出5条SOD同工酶条带:条带1的相对定量逐渐升高出现峰值或者趋于稳定时,愈伤组织开始出现不定芽,条带1相对定量较高时出现玻璃化不定芽;当条带1的相对定量突然升高且一直保持在较高水平时,或相对定量降低且保持在较低水平时,愈伤组织会出现玻璃化或者褐化现象。4.在5种培养基中培养的愈伤组织中,共检测出3条EST同工酶条带:条带1和2的开始表达时,愈伤组织出现不定芽或者将要出现不定芽;条带3相对定量较高时,愈伤组织出现褐化或者玻璃化现象。5.愈伤组织在不同浓度PEG6000胁迫下,POD、SOD和CAT三种同工酶酶活性变化如下:PEG6000浓度为0时,108 h内三种同工酶酶活性基本保持不变;在PEG6000浓度为0.5%-5.0%时,随着PEG6000浓度的增加,以及胁迫时间的延长,三种同工酶活性均平稳升高,且愈伤组织的生长状态良好,仅在PEG6000浓度为5.0%时出现了轻微的白化现象;当PEG6000浓度为8.0%时,POD酶活性迅速升高之后缓慢下降,SOD与CAT酶活性迅速升高之后又迅速下降。6.在不同浓度PEG6000的静置液态培养基中,共检测出8条POD同工酶条带、5条SOD同工酶条带和2条EST同工酶条带:PEG6000浓度为5.0%以下时,愈伤组织均保持生理活性,同工酶能正常表达;在PEG6000浓度为8.0%时,大多数POD同工酶条带表达量逐渐降低直至完全消失,SOD同工酶中条带2呈现出迅速升高后迅速降低的变化趋势,在108 h时相对定量为0,而EST同工酶条带只在前24 h有表达,愈伤组织无法正常生长。
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