论文部分内容阅读
耐药性是细菌适应性进化的结果,为了探究突变选择窗(MSW)变化与耐药菌选择性富集的关系,本文采用兔组织笼感染模型研究阿莫西林不同给药方案对金黄色葡萄球菌耐药性产生和富增的影响,同时对耐药菌基因组扫描测序及耐药基因筛选,初步确定该菌的耐药机制。研究结果如下:1体外条件下,阿莫西林对金黄色葡萄球菌ATCC6538的最小抑菌浓度(MIC)为0.25 μg/mL,抑制99%细菌浓度(MIC99)为0.20 μg/mL,暂定防突变浓度(MPCpr)为4.00 μg/mL,防突变浓度(MPC)为3.00 μg/mL。MSW的范围在0.20 μg/mL到3.00 μg/mL 之间。2成功建立兔组织笼感染模型,以5mg/kg/12h(n=5)、1 0mg/kg/12h(n=5)、20mg/kg/12h(n=4)、30mg/kg/12h(n=4)、5mg/kg/24h(n=5)、10mg/kg/24h(n=5)、20 mg/kg/24h(n=5)、30mg/kg/24h(n=4)剂量组,臀部肌注阿莫西林注射液;空白对照组(n=3),以相同方式注射无菌生理盐水,连续给药5次。分别于不同时间点采集兔组织液用于药物浓度的测定和细菌含量的测定。得出体内不同给药方案下,给药间隔时间相同的组,给药剂量越高,出现耐药菌的时间越早;给药剂量相同的组,给药间隔越长,耐药菌出现的时间越早。耐药程度呈累积性增长,随着给药时间的延长,耐药程度越高。当%T>]MPC大于等于52%时,既能产生良好的抗菌活性,又能抑制耐药性的发生。3采用Illumina测序技术完成3株菌株的基因组扫描测序,通过基因注释、COG分析、GO分析、KEGG分析等方法,筛选出与耐药性相关的基因有mecA、femA、femB和femX基因,通过对耐药基因功能分析,其耐药性产生机制是由mecA基因表达产生PBP2a蛋白,fem类基因调控细胞壁中肽聚糖的合成引起。耐药基因未发生碱基替换、错位、缺失等现象,说明耐药性产生未发生在基因水平,可能发生在转录水平或蛋白水平,还需进一步研究。综合以上结果得出,阿莫西林MSW的变化对金黄色葡萄球菌耐药性的产生时间和富增程度都可产生影响。维持药物浓度大于MPC的时间占给药间隔的百分比大于52%时,既能产生良好的抗菌活性,又能抑制耐药性的发生。本研究通过对耐药菌基因组测序,得到耐药性相关的基因有mecA、femA、femB和femX。