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目的：观察电针“足三里、昆仑穴”对腰5神经脊神经结扎模型（SNL）大鼠脊髓背角小胶质细胞活化以及BDNF、P2X4、GABAAγ2的影响；同时利用在体电生理技术检测电针对慢性病理性疼痛模型大鼠脊髓背角突触可塑性变化的影响。阐明电针影响脊髓背角小胶质细胞活化，并诱导P2X4R/BDNF信号通路，上调GABAAγ2蛋白表达在电针治疗慢性神经病理性疼痛中的作用及可能机制。
方法：选取成年雄性SD大鼠（180-220g）按照标准实验室喂养，随机分为6组，包括假模组（sham组）、模型组（SNL组）、电针组（EA组）、抑制剂组（5-BDBD组）、电针+抑制剂组（EA+5-BDBD组）、假针刺组（Control组）。所有动物模型手术均在超净台显微镜下操作，去除右侧腰5椎横突，暴露右侧L4-5脊神经，钝性分离右侧L5脊神经并用4-0丝线紧密结扎，然后止血，关闭伤口并消毒。之后连续3天，每天注射5万单位青霉素钠。在Sham组中，仅暴露不结扎右侧L5脊神经。在造模前测量一次疼痛缩足阈值基础值，然后在术后第3、5、7、10、12、14天再次测量疼痛缩足阈值。电针组、抑制剂组和抑制剂+电针组在术后第7天开始干预治疗，其中电针组连续治疗7天，每天一次，每次30分钟；抑制剂组连续给药7天，每天注射0.18mg抑制剂；电针+抑制剂组在电针治疗30分钟后，休息30分钟，再注射抑制剂。各时间点测定以及干预治疗后，心脏灌注处死大鼠，取L4-6脊髓，利用Westernblotting技术观察大鼠脊髓Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2的蛋白表达；利用免疫荧光技术观察大鼠脊髓背角Iba-1(小胶质细胞标记物)以及P2X4、BDNF、GABAAγ2的表达；采用实时荧光定量PCR检测脊髓L4-6中Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2mRNA的表达；利用在体电生理技术观察大鼠脊髓背角兴奋性突触后电位长时程的影响。
结果：
1.行为学：各组术前的MWT、TWL值对比无统计学意义(P＞0.05)；电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠经过干预治疗后，在第10、12、14天MWT值和TWL值均比同期时间点SNL组高，有统计学意义(P＜0.05)。手术后大鼠运动功能评分均升高，干预治疗后，电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠运动功能评分降低，术后第14天的运动功能评分明显低于模型组和针刺对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
2.电针对各组大鼠Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2表达的影响：SNL组和针刺对照组Iba-1、BDNF、P2X4荧光强度均较强，而GABAAγ2荧光强度较微弱；sham组的GABAAγ2荧光强度对比SNL组(或电针对照组)明显增强，而Iba-1、BDNF、P2X4表达降低；经过7天的干预后，电针组P2X4、Iba-1荧光强度较SNL组弱而BDNF较sham组升高，GABAAγ2荧光强度较SNL组变强；与抑制剂组、电针+抑制剂组相比，两者差异不大。
3.电针对各组大鼠Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2蛋白表达的影响：SNL组与其余各组比较，Iba-1、BDNF、P2X4蛋白表达明显升高，GABAAγ2蛋白表达下降明显(P＜0.05)；电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组三组互相比较，表达差异不明显；与针刺对照组比较，Iba-1、BDNF、P2X4蛋白明显减少，GABAAγ2蛋白表达升高(P＜0.05)。
4.各组大鼠脊髓背角场电位记录结果分析：sham组、SNL组和电针对照组在给与高频重复刺激后，均可诱导出脊髓背角场电位LTP，并持续记录2小时；而电针组、抑制剂组和电针+抑制剂组在给与高频重复刺激后，无法诱导出LTP；SNL组与电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组相比，场电位面积大于其余3组，有统计学意义(P＜0.05)。
5.实时荧光定量PCR检测显示，SNL组与针刺对照的Iba-1、BDNF、P2X4mRNA表达水平显著高于sham组而sham组GABAAγ2mRNA表达则相反（P＜0.01）。经过7天干预后，电针组与模型组比较，经电针治疗后Iba-1、P2X4mRNA表达水平降低而GABAAγ2mRNA升高（P＜0.01）。
结论：
1.电针刺激“足三里”和“昆仑”穴位后，能提高慢性神经病理性疼痛模型大鼠的机械缩足反射阈值以及热缩足反射阈值，提示电针对SNL模型引起的神经病理性疼痛具有缓解作用。
2.电针可能是通过下调小胶质细胞激活，继而下调P2X4R/BDNF信号通路，上调GABAAγ2蛋白表达，营养神经，促进修复，增强镇痛。
3.电针通过抑制小胶质细胞活化，下调P2X4R/BDNF通路，上调GABAA受体的表达，继而抑制脊髓背角兴奋性突触后电位，降低由外周到脊髓～大脑的神经环路的兴奋性，发挥镇痛效应。
方法：选取成年雄性SD大鼠（180-220g）按照标准实验室喂养，随机分为6组，包括假模组（sham组）、模型组（SNL组）、电针组（EA组）、抑制剂组（5-BDBD组）、电针+抑制剂组（EA+5-BDBD组）、假针刺组（Control组）。所有动物模型手术均在超净台显微镜下操作，去除右侧腰5椎横突，暴露右侧L4-5脊神经，钝性分离右侧L5脊神经并用4-0丝线紧密结扎，然后止血，关闭伤口并消毒。之后连续3天，每天注射5万单位青霉素钠。在Sham组中，仅暴露不结扎右侧L5脊神经。在造模前测量一次疼痛缩足阈值基础值，然后在术后第3、5、7、10、12、14天再次测量疼痛缩足阈值。电针组、抑制剂组和抑制剂+电针组在术后第7天开始干预治疗，其中电针组连续治疗7天，每天一次，每次30分钟；抑制剂组连续给药7天，每天注射0.18mg抑制剂；电针+抑制剂组在电针治疗30分钟后，休息30分钟，再注射抑制剂。各时间点测定以及干预治疗后，心脏灌注处死大鼠，取L4-6脊髓，利用Westernblotting技术观察大鼠脊髓Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2的蛋白表达；利用免疫荧光技术观察大鼠脊髓背角Iba-1(小胶质细胞标记物)以及P2X4、BDNF、GABAAγ2的表达；采用实时荧光定量PCR检测脊髓L4-6中Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2mRNA的表达；利用在体电生理技术观察大鼠脊髓背角兴奋性突触后电位长时程的影响。
结果：
1.行为学：各组术前的MWT、TWL值对比无统计学意义(P＞0.05)；电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠经过干预治疗后，在第10、12、14天MWT值和TWL值均比同期时间点SNL组高，有统计学意义(P＜0.05)。手术后大鼠运动功能评分均升高，干预治疗后，电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠运动功能评分降低，术后第14天的运动功能评分明显低于模型组和针刺对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
2.电针对各组大鼠Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2表达的影响：SNL组和针刺对照组Iba-1、BDNF、P2X4荧光强度均较强，而GABAAγ2荧光强度较微弱；sham组的GABAAγ2荧光强度对比SNL组(或电针对照组)明显增强，而Iba-1、BDNF、P2X4表达降低；经过7天的干预后，电针组P2X4、Iba-1荧光强度较SNL组弱而BDNF较sham组升高，GABAAγ2荧光强度较SNL组变强；与抑制剂组、电针+抑制剂组相比，两者差异不大。
3.电针对各组大鼠Iba-1、BDNF、P2X4、GABAAγ2蛋白表达的影响：SNL组与其余各组比较，Iba-1、BDNF、P2X4蛋白表达明显升高，GABAAγ2蛋白表达下降明显(P＜0.05)；电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组三组互相比较，表达差异不明显；与针刺对照组比较，Iba-1、BDNF、P2X4蛋白明显减少，GABAAγ2蛋白表达升高(P＜0.05)。
4.各组大鼠脊髓背角场电位记录结果分析：sham组、SNL组和电针对照组在给与高频重复刺激后，均可诱导出脊髓背角场电位LTP，并持续记录2小时；而电针组、抑制剂组和电针+抑制剂组在给与高频重复刺激后，无法诱导出LTP；SNL组与电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组相比，场电位面积大于其余3组，有统计学意义(P＜0.05)。
5.实时荧光定量PCR检测显示，SNL组与针刺对照的Iba-1、BDNF、P2X4mRNA表达水平显著高于sham组而sham组GABAAγ2mRNA表达则相反（P＜0.01）。经过7天干预后，电针组与模型组比较，经电针治疗后Iba-1、P2X4mRNA表达水平降低而GABAAγ2mRNA升高（P＜0.01）。
结论：
1.电针刺激“足三里”和“昆仑”穴位后，能提高慢性神经病理性疼痛模型大鼠的机械缩足反射阈值以及热缩足反射阈值，提示电针对SNL模型引起的神经病理性疼痛具有缓解作用。
2.电针可能是通过下调小胶质细胞激活，继而下调P2X4R/BDNF信号通路，上调GABAAγ2蛋白表达，营养神经，促进修复，增强镇痛。
3.电针通过抑制小胶质细胞活化，下调P2X4R/BDNF通路，上调GABAA受体的表达，继而抑制脊髓背角兴奋性突触后电位，降低由外周到脊髓～大脑的神经环路的兴奋性，发挥镇痛效应。