论文部分内容阅读
目的:观察除痹健膝汤对大鼠血清中MMP-3、MMP-13以及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况的影响,探讨除痹健膝汤通过Wnt/β-catenin信号通路治疗大鼠膝关节骨性关节炎的作用机制,为除痹健膝汤临床治疗KOA以及深入开发及推广提供支持和依据。方法:将70只雄性SPF级SD大鼠适应性喂养1周后,随机选取50只造模,向大鼠左膝关节注射浓度为40mg/ml的碘乙酸钠溶液50ul,造模后随机分为模型组、藤黄健骨片组、除痹健膝汤高中低浓度组,每组10只,剩余20只随机分为空白组、假手术组,每组10只,向假手术组大鼠左膝关节注射生理盐水50ul,空白组不做处理。确定造模成功后,用不同药物灌胃干预2周后取材。观察大鼠饮食量、精神状态、左膝关节肿胀度、关节屈伸活动度、活动量等一般情况;通过双抗体夹心酶联免疫吸附实验法（ELISA法）检测大鼠血清中MMP-3、MMP-13的水平改变;采用Western blot检测Wnt-2、β-catenin蛋白的表达情况。结果:1.ELISA检测大鼠血清中MMP-3、MMP-13的数据结果统计分析显示:F组与G组相比较,得出F组与G组之间大鼠血清中MMP-3、MMP-13的水平无明显差别,p>0.05,无统计学意义;与空白组相比较,模型组、不同浓度药物实验组、阳性药物组的MMP-3、MMP-13的水平明显升高,p<0.05,差异具有统计学意义;与E组相比较,A、B、C、D各组血清中MMP-3、MMP-13的值均低于E组,p<0.05,具有统计学意义;通过比较A组与B、C、D组发现,A组与B组血清中MMP-3、MMP-13的值相似,p>0.05,无明显差异,无明显统计学意义;A组与C组相比较,A组血清中MMP-3、MMP-13的值低于C组,p<0.05,A组与D组相比较,D组血清中MMP-3、MMP-13的值明显高于A组,p<0.05,具有统计学意义;通过比较B、C、D各组血清中MMP-3、MMP-13的水平值发现,血清中MMP-3、MMP-13指标具有基本相同的变化趋势,即B组<C组<D组,B组与C组相比,p<0.05,B组与D组相比较,p<0.05,C组与D组相比,p<0.05,检验分析具有统计学意义。2.使用Western blot检测各组大鼠软骨中Wnt2、β-catenin蛋白的表达情况,根据数据结果统计分析显示:假手术组与空白组相比较,p<0.05,Wnt2、β-catenin蛋白表达无明显变化,无统计学意义;与空白组相比,模型组、不同浓度药物实验组、阳性药物组Wnt2、β-catenin蛋白表达升高,p<0.05,差异具有统计学意义;与模型组相比,A、B、C、D各组Wnt2、β-catenin蛋白表达均下降,p<0.05,具有统计学意义;通过比较A组与B、C、D组,A组与B组Wnt2、β-catenin蛋白表达相似,p>0.05,无统计学意义;通过比较B、C、D各组Wnt2、β-catenin蛋白表达发现,蛋白表达指标具有基本相同的变化趋势,即B组<C组<D组,B组与C组相比,p<0.05,B组与D组相比较,p<0.05,C组与D组相比,p<0.05,检验分析具有统计学意义。结论:除痹健膝汤能抑制KOA大鼠模型中软骨细胞的Wnt2、β-catenin蛋白的表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路,下调信号通路上下游靶基因MMP-3、MMP-13的表达,减少其对关节软骨的分解代谢,达到治疗膝关节骨性关节炎的目的。