1-芘丁酸是多环芳烃中最常见的一种衍生物,主要存在于水、空气和土壤中。它具有雌激素的性质,会对人体的免疫系统、神经系统以及血液循环造成损害,可以和DNA分子发生共价结合,使其转录和复制出现错误而产生癌变。目前1-芘丁酸等多环芳烃类物质的检测方法主要是气相、液相、荧光、电泳等衍生方法,这些方法成本较高,对操作人员要求严格,费时长,相比之下,免疫学检测技术因其速度快、敏感性好、特异性高、适用于大批量样品的快速检测,目前被用于食品中多环芳烃的检测。本文通过碳化二亚胺法(EDC)制备出了 1-芘丁酸人工抗原,运用杂交瘤细胞技术筛选出了敏感性、特异性较好的针对1-芘丁酸的单克隆抗体,并且成功组装出1-芘丁酸间接竞争ELISA试剂盒。1.1-芘丁酸人工抗原的制备与鉴定利用EDC将1-芘丁酸与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)以及鸡卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成完全人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。运用紫外扫描法、聚丙烯凝胶电泳法以及动物免疫的方法对其性质进行鉴定。结果显示:PBA-BSA、PBA-OVA分别与BSA、OVA相比,其最大吸收峰出现差异;PBA-BSA的涌动速度与BSA相比较慢,出现拖尾现象;对免疫小鼠的多克隆抗体血清进行测定,其效价最高可达1:1.28×104,IC50=5.94ng/mL。由此可知,1-芘丁酸完全人工抗原制备成功。2.1-芘丁酸单克隆抗体的制备与鉴定选取经1-芘丁酸完全人工抗原免疫后敏感性好的小鼠进行细胞融合试验,通过阳性杂交瘤细胞筛选技术,制备出一株能稳定分泌1-芘丁酸单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,命名为10C2A6,并对其效价、敏感性、亲和力、亚型以及特异性进行鉴定。结果显示:效价高达1:2.56× 105,亚型为IgG2b型,IC50为0.86ng/mL,与其他类似物的交叉反应均小于1.7%,亲和力为1.96×109L/mol,由结果可知,制备出了特异性强、敏感性好的1-芘丁酸单克隆抗体,为1-芘丁酸的免疫学快速检测方法的建立奠定良好的基础。3.1-芘丁酸间接竞争ELISA试剂盒的制备与鉴定利用棋盘法和正交试验确定了 ELISA试剂盒的最佳工作流程,组装出了1-芘丁酸间接竞争ELISA试剂盒,并对其敏感性、灵敏度、准确度、稳定性等性质进行鉴定。结果显示:1-芘丁酸间接竞争ELISA试剂盒标准曲线R2=0.9939,回归性良好;灵敏度为0.010ng/mL,添加回收率为77.2%-95.8%,变异系数为3.01%-6.46%,小于15%,说明准确度较高;通过交叉反应可以看出与1-芘甲醇、1-芘甲醛以及芘等类似物的交叉反应率小于等于0.33%,与菲、萘、苯并芘、BSA以及OVA的交叉反应率均小于0.05%,其特异性较好;试剂盒稳定性良好,至少可以避光保存180天。