狂犬病是一种严重危害人类公共卫生安全的疫病,是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）感染中枢神经系统引起的一类神经性传染病。从最初发现开始,已经影响了人类几千年,是已知最古老的人畜共患病之一。不过,通过科研人员对狂犬病病毒的长期研究,目前也取得了丰硕的成果。狂犬病病毒由五个蛋白组成,分别为N、P、M、G、L,这五个蛋白分别有不同的功能,却又可以相互协同。M蛋白是其中分子量最小的,为20 k Da,它在病毒的形态维持、复制和转录过程中发挥着主要的作用。本研究小组前期的研究成果显示了M蛋白44和46位点氨基酸突变成强毒株GX01的相应氨基酸后对狂犬病病毒的复制和转录有很大的影响,因此,我们认为此两个位点突变病毒的M蛋白具有很大的研究价值,决定对其互作蛋白进行相关探究。本研究中采用了酵母双杂交系统来筛选与重组狂犬病病毒rRC-HLM（F44L/S46G）蛋白相互作用的宿主蛋白。因为酵母双杂交系统具有原理简单、对蛋白间的互作敏感、效率高、模拟度较高等优点,成为一种应用很广泛的蛋白质互作研究工具。通过分子克隆,首先设计引物,PCR扩增狂犬病病毒rRC-HL（F44L/S46G）完整的M基因序列,将其与p MD18-T载体相连,抽提质粒,双酶切之后用T4连接酶将酶切产物与酵母双杂交系统所用载体p GBKT7（BD）相连,表达载体BD-M即构建成功。将此表达载体转化进入Y2HGOLD酵母细胞中,诱饵酵母即构建成功。然后将诱饵蛋白浓缩液与Mate＆Plate?Library-Mouse Brain（Normalized）文库杂交共培养,经过营养缺陷培养基和药物筛选、蓝白斑筛选确认,挑取蓝色阳性克隆送去测序,BLAST对比测序结果,得出了三种互作蛋白,分别是晚期内溶酶体适配子——Lamtor5、一般转录因子——GTF2E2和活化STAT1蛋白抑制剂——PIAS1,这三者都是宿主常在蛋白,可以直接在细胞内检测到它们的表达。将NA细胞感染狂犬病病毒后制成细胞样品,用Western Blot和实时荧光定量PCR法进一步检测狂犬病病毒rRC-HL、rRC-HL（M44/46）感染NA细胞24、48、72h后靶标蛋白在病毒感染过程中其基因转录水平和蛋白表达水平的变化。结果显示,Lamtor5和GTF2E2的m RNA水平有轻微提高,Pias1是呈下调状态;蛋白表达水平呈现相似情况,Lamtor5和GTF2E2呈现轻微上调,Pias1蛋白表达水平稍有下降。本研究筛选到三种与狂犬病病毒M蛋白互作的宿主蛋白,其中PIAS1作为一种SUMO E3连接酶,与天然免疫过程中的抗病毒信号通路如STAT和NF-κB有密切关系,推测PIAS1作为狂犬病病毒侵入后体内抗病毒信号通路的下游关键调节因子,参与机体的抗病毒过程。这些结果对进一步探索M蛋白的结构与功能相关性,具有重要的实践意义。