可口革囊星虫蛋白提取及酶法制备降血压肽的研究

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可口革囊星虫是一种高蛋白低脂肪的海洋生物,氨基酸含量丰富、种类齐全,是一种优质的蛋白源;血管紧张素转化酶(ACE)在血压调控中起着重要作用,将血管紧张素Ⅰ转换成血管紧张素Ⅱ,使血压升高;本研究以可口革囊星虫蛋白制备降压肽为目的,进行了以下工作:1、可口革囊星虫水溶性蛋白研究表明,水溶性蛋白提取最佳工艺为:NaCl浓度1%(w/v)、料液比1:20、温度50℃、时间4h,星虫蛋白提取率达到42%。SDS-PAGE显示,星虫蛋白条带主要分布为:110、80、44、36、18、12kDa。研究发现,可口革囊星虫水溶性蛋白的ACE抑制率较低,有待于进一步酶解研究。2、研究了胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶等五种酶对星虫蛋白的酶解,胃蛋白酶为最佳水解酶,最优条件为pH1.8、酶解时间4h、酶量0.2%(w/v),酶解产物的半抑制率(IC50)为1.85mg/ml。3、研究了可口革囊星虫蛋白酶解物的分离纯化、结构鉴定以及活性探究等,结果表明:1)酶解产物经过超滤、离子交换、葡聚糖凝胶与RP-HPLC等分离技术得到了纯化。随着分离纯化的进行,其降血压活性随之增加,IC50值由酶解产物的1.85mg/ml,降低为纯化组分P(pl-d-III)的0.165mg/ml,抑制活性增加了10倍。2)组分P经MALDI-TOF/TOF分析,其分子量为1222.7Da,其氨基酸序列为Ala-Trp-Leu-His-Pro-Gly-Ala-Pro-lys-Val-Phe。与公开序列比较,尚未找到相同序列,是一种新的降血压肽,命名为XFpl。3)组分P的性质研究表明,其具有温度、pH等稳定性,在模拟胃液中也稳定,而在模拟肠液中稳定性不足,然而其ACE抑制活性提高了20%左右。4)研究组分P对酶ACE的抑制类型发现,抑制剂pl-d-Ⅲ是ACE酶的竞争性抑制剂,即与底物竞争结合酶的活性位点。4、自发性高血压大鼠(SHR)急性实验表明:在给药后2h,血压开始明显下降;星虫蛋白的降血压活性较低,胃蛋白酶水解产物与纯化肽P分别表现出较高的降血压活性,收缩压(SBP)分别降低了24和43mmHg。另外,纯化肽P保持较高的降血压活性,而且活性持续时间较长。
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