超声辅助酶法制备大豆分离蛋白ACEI活性肽的研究

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以大豆分离蛋白为原料,研究降血压肽的制备技术以及超声对大豆分离蛋白作用机理和动力学特性的影响,进行的研究如下:用七种商业用酶分别酶解大豆分离蛋白,测定酶解液对ACE的抑制率。其中,碱性蛋白酶(无锡)酶解效果较好。单因素的基础上选择酶解时间、底物浓度、加酶量、温度、pH进行正交验证实验,得出酶解的最优工艺条件为:反应温度50℃、反应时间90min、加酶量0.08mL/g、底物浓度6%、pH值8.5。超声预处理大豆分离蛋白、超声预处理蛋白酶和酶解过程中施加超声,三种不同的酶解工艺的比较得到超声对大豆分离蛋白预处理的酶解效果最好,采用此工艺,得到最佳的预处理参数为超声时间30min、超声处理温度50℃、超声功率400W/L,在最佳参数下,酶解产物的ACE抑制率达到90.29%;其次研究超声对酶的处理,酶活力有一定的提高,在超声处理10min、功率1200W/L时,酶活力提高最多,增幅达到6.89%;再次研究了酶解过程中施加超声,酶解物ACE的抑制率有小幅度的增加,在超声功率为800 W/L时仅增加2.2%,但是随着功率的继续增加,酶解产物ACE的抑制率明显下降。大豆分离蛋白经过超声循环预处理后测定微观结构的变化,分别研究了超声对大豆分离蛋白的表面疏水性、游离巯基含量、溶解度的影响。当超声功率为400W/L时,表面疏水性达到最大,与未经超声处理相比提高了39%;750W/L时巯基含量最高,与未接受超声处理比较增加了12%:当超声功率为500W/L时,蛋白溶解度达到最大,与未经过超声处理的样品对比增加了1.3倍。研究了超声对大豆分离蛋白酶解反应动力学的影响,确定了Vmax和Km。超声加快了蛋白的酶解速度,Km提高了83.7%,Vmax提高了76%,并且从机理上探讨了酶解的最佳pH和温度,测得pH9.05和温度50℃为最佳理论值。
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