【背景】恶性肿瘤的发生是多步骤、多基因突变的结果，从分子水平上研究肿瘤发生机制及癌基因、抑癌基因与肿瘤的关系已成为卵巢肿瘤基因治疗的研究热点。DOC-2基因是一个肿瘤抑制基因，编码一个具有信号转导功能的新的磷蛋白，广泛存在于正常组织中，在乳腺和卵巢上皮组织中呈强表达，而在卵巢癌，绒癌，前列腺癌，乳腺癌等多种肿瘤组织和细胞系中呈低表达或无表达，它的再表达能明显抑制多种肿瘤细胞系的生长和增殖，说明DOC-2在抑制肿瘤生长方面发挥重要作用。我们实验室在前期工作中采用RT-PCR的方法克隆得到DOC-2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域的cDNA，并利用其表达产物制备了DOC-2的多克隆抗体，构建了含有DOC-2 cDNA的真核表达载体，在此基础上我们设计了本实验。 【目的】通过检测卵巢上皮性肿瘤中DOC-2的表达及卵巢癌细胞TC-1转染DOC-2后细胞生物学行为的变化，以分析其在卵巢肿瘤发生发展中的作用，探讨肿瘤抑制基因治疗卵巢癌的可能性。 【方法】1．采用免疫组化法检测卵巢上皮性肿瘤及人卵巢癌细胞系TC-1细胞中DOC-2的表达。2．利用脂质体介导的转染技术，将含有DOC-2 cDNA的真核表达重组质粒pcDNA3.1-p93，导入 第四军医大学硕士学位论文Doc一2呈阴性表达的Tc一1细胞，同时将空载体质粒poDNA3.1(+)导入TC一1细胞，作为对照细胞株，G418筛选阳性克隆。3.采用免疫细胞化学法鉴定转染效果。4.通过MTT法绘制转染细胞及其对照细胞的细胞生长曲线，观察转染后细胞增长率的变化。5.通过平板克隆形成实验观察细胞形成克隆能力的改变。6.借助流式细胞仪观察DOC一2对细胞周期的影响。[结果】1. DOC一2在卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤及卵巢癌中的免疫组化阳性表达率分别为100%、38.5%和40%，良性肿瘤与交界性肿瘤、卵巢癌相比差异显著(P<0.01)，交界性肿瘤与卵巢癌相比无显著差异(P>0.05);不同组织学类型的卵巢肿瘤中DOC一2蛋白阳性表达率无显著差异(P>0.05);DOC一2蛋白在不同临床分期及病理分级的卵巢癌中阳性表达率无显著差异(P>0.05)。2.TC一1细胞呈DOC一2蛋白阴性染色。3.获得稳定表达DOC一2蛋白的细胞系Tc一p93和抗G418但不表达DoC一2蛋白的细胞系Te一penN^3.1。4.Te一p93细胞中ooe一2蛋白呈阳性表达，而TC一peDNA3.l细胞中无表达。5.TC一p93和TC一peDNA3.1细胞形态与TC一1细胞无显著差别。6.TC一p93细胞生长明显比TC一1慢，而Tc一pcDNA3 .1细胞生长与Tc一1相当。7. Tc一p93细胞克隆形成率，为8.7士3.1%，显著少于TC一1细胞与转染了空载体的TC一peDNA3.l细胞，分别为44士3.6%和54.3士3.2%。8.TC一p93细胞与对照组细胞相比，Gl期细胞百分比增高，S期细胞比例降低，增殖指数减小，细胞明显阻滞于Gl期，细胞周期延长，增殖减慢。 [结论】DOC一2是卵巢肿瘤的一个抑制基因，在卵巢上皮细胞的生长和分化中起着重要作用，它的表达下调和正常卵巢上皮的恶性转化相关，是卵巢上皮性肿瘤恶变的早期事件。人卵巢癌细胞系TC一1是建立高表达DOC一2蛋白细胞株理想的卵巢癌细胞系。转染后获得稳定表达DOC一2的细胞株，证明转染成功。DOC一2 第四军医大学硕士学位论文的表达能明显抑制人卵巢癌细胞系TC一1的增殖，一定程度上抑制了癌细胞的恶性表型，对其生长起负调节作用。其对细胞生长的负调节作用主要是通过阻滞细胞Gl期来实现的。